弓形虫重组蛋白SAG1纳米金生物传感器诊断弓形虫病的研究

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目的:克隆和表达弓形虫截短型主要表面抗原1(tSAG1),建立诊断弓形虫病的纳米金生物传感器。方法:以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1编码区515位至1267位的核酸序列,克隆至pMD18-T载体,测序鉴定,亚克隆至表达载体pET-28a(+),诱导表达tSAG1,金属螯合层析纯化,Western blot分析其免疫活性。种子生长法制备金纳米棒(Au NRs),偶联tSAG1,构建tSAG1-Au NRs生物传感器检测人血清抗弓形虫SAG1抗体;采用非参数检验分析测定值,按大于或等于体检健康者血清红移值的x+2SD判定为阳性,计算敏感度、特异度、预测值和诊断效率。谷胱甘肽法制备金纳米簇,经活化后,与羊抗人IgG连接;将tSAG1包被在微孔板孔内,与人血清弓形虫抗体结合,再与金纳米簇-羊抗人IgG作用,加入柠檬酸三钠溶液及吗啉乙磺酸-水合物溶液稀释的过氧化氢反应30min,再加入氯金酸溶液反应1h,肉眼观察结果,并测定550nm处的吸光度值OD550;采用非参数检验分析测定值,按小于或等于体检健康者血清OD550的x-2SD判定为阳性,计算敏感度、特异度、预测值和诊断效率。结果:构建了tSAG1的表达质粒,表达纯化获得有免疫反应性的tSAG1,分子质量为约30kDa。tSAG1-Au NRs生物传感器的检验敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率依次为80.9%、90.0%、90.2%、80.6%和85.2%。基于金纳米簇模拟酶性质构建的可视化生物传感器的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率依次为80.0%、90.0%、88.9%、81.8%和85.0%。结论:基于重组tSAG1建立的纳米金生物传感器可用于检测弓形虫抗体。
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