研究背景与目的: 高血压靶器官损害是高血压致死致残的主要原因。心室重构是高血压最主要的靶器官损害之一。心肌纤维化是其中重要的病理改变，表现为心肌正常组织结构中胶原纤维过量积聚、心脏组织中胶原浓度显著升高或胶原成分发生改变，Ⅰ型胶原比例增加，从而使心肌僵硬度增加、顺应性降低、左室舒张功能减退。纤维化机制复杂，由多个系统参与调节。心脏局部的肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）/c-Met 系统是调节心肌胶原的沉积和降解的重要因素。血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）是RAS 主要的效应分子，是重要的促纤维化因子。HGF 是一种多功能生长因子，有促有丝分裂、细胞迁移和细胞形态发生的作用，能促进血管生成、抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌纤维化，是心血管系统的保护因子，与高血压及心肌纤维化密切相关。近年来屡见报道HGF 在心肌缺血、心肌病等病理模型中具抑制纤维化的作用，但对于其对原发性高血压所致的心肌纤维化的作用及与RAS 的关系的研究很少，也未见关于HGF 对心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFbs）Ⅰ型胶原合成的影响及其机制的研究。本研究拟探讨高血压心肌纤维化病程中HGF 的作用，及其对CFbs 胶原合成的影响及机制。 方法: 1. 以自发性高血压大鼠（spontaneous hypertension rat，SHR）为高血压心肌纤维化模型，WKY 为对照。取8 周、12 周、16 周、24 周、32周雄性WKY 和SHR 大鼠各3 只，处死后取心脏组织制成石蜡切片。 另取4 周龄、16 周龄SHR 大鼠各6 只，分别随机分成用药组和对照组，用药组给予每千克体重20mg 洛沙坦灌胃，一天一次。4 周龄大鼠处理至16 周，16 周龄大鼠处理至32 周后处死取心脏制成石蜡切片，分别代表早期和晚期治疗。利用麦松（masson）三色法检测心肌胶原含量，免疫组织化学方法检测心肌组织HGF 含量。利用LeicaQwin 彩色图象分析系统分析以上masson 染色及免疫组化图片，计算心肌胶原容积分数（collagen volume fraction，CVF）及HGF 含量。 CVF=胶原面积/全视野组织面积，即胶原组织所占面积百分比；HGF含量=HGF 阳性面积百分比×平均灰度值，阳性面积百分比即阳性斑块面积占全视野组织面积百分比。通过比较各组CVF、HGF 含量变化，观察高血压心肌纤维化病程的发生发展及RAS 与HGF 在此病程中的作用。 2. 原代培养SD大鼠心肌成纤维细胞，用10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/LAngⅡ分别孵育48h，以四氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法方法检测细胞增殖，评价AngⅡ对CFbs增殖的影响；用20ng/mlHGF和10-7 mol/L AngⅡ共同孵育CFbs 24h、48h，以MTT方法检测细胞增殖，评价HGF对AngⅡ诱导的CFbs增殖的影响。 3. 原代培养SD大鼠心肌成纤维细胞，用10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/LAngⅡ分别孵育48h，以蛋白免疫印迹方法检测Ⅰ型胶原蛋白，评价AngⅡ对CFbsⅠ型胶原蛋白合成的影响；用0、1、10、20、40、100ng/mlHGF分别和10-7 mol/L AngⅡ共同孵育CFbs 48h，以蛋白免疫印迹方法检测Ⅰ型胶原蛋白，评价HGF对AngⅡ诱导的CFbsⅠ型胶原蛋白合成的影响。 4. 原代培养SD 大鼠心肌成纤维细胞，ERK1/2 阻断剂PD98059、p38MAPK阻断剂SB203580、JNK 阻断剂SP600125 预处理后用AngⅡ和HGF 共同孵育48h，以蛋白免疫印迹方法检测Ⅰ型胶原蛋白，评价ERK1/2、p38MAPK、JNK 信号转导通路在HGF 抑制AngⅡ诱导的CFbsⅠ型胶原蛋白合成中的作用。 结果: 1. 比较各周龄组WKY 与SHR 大鼠的CVF 发现：随周龄增长，两组大鼠心肌胶原含量均增加。SHR 组自12 周起，WKY 自16 周起CVF显著增加，自12 周始，SHR 组CVF 显著高于同周龄WKY 组。 2. HGF 免疫组化结果显示，随着周龄增加，WKY 与SHR 组HGF 表达均降低。SHR 组自12 周起，WKY 组自16 周起，心肌组织HGF 含量显著降低，自16 周始，SHR 组HGF 表达显著低于同周龄WKY 组。 3. SHR 大鼠CVF 随周龄增长而增加，而心肌组织HGF 含量随周龄增长而降低，CVF 与心肌组织HGF 含量呈负相关。 4. 以洛沙坦早期（4 周～16 周）或晚期（16～32 周）干预SHR 大鼠，发现治疗后大鼠心肌胶原含量显著低于同周龄SHR 大鼠，而HGF 含量显著增加。 5. 用10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L AngⅡ孵育CFbs 48h后，促进CFbs增殖，在AngⅡ浓度高于10-7mol/L时具统计学意义。10-7mol/L AngⅡ 孵育24h或48h均能促进CFbs增殖。HGF抑制AngⅡ诱导的CFbs增殖，孵育24h呈部分抑制作用，孵育48h后，差异显著。 6. 蛋白免疫印迹结果显示，用10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L AngⅡ 孵育CFbs 48 小时后，CFbsⅠ型胶原蛋白合成增加。浓度大于10-7mol/L时与对照组有显著差异，但无剂量依赖性。HGF能部分抑制AngⅡ的作用,并呈剂量依赖性。 7. ERK1/2 通路阻断剂PD98059、p38MAPK 通路阻断剂SB203580、JNK通路阻断剂SP600125 均能阻断HGF 对AngⅡ诱导的CFbsⅠ型胶原蛋白合成的抑制作用。 结论: 1. SHR 大鼠CVF 随周龄增长而增加，与心肌组织HGF 含量负相关。洛沙坦干预可增加HGF 表达，降低CVF。提示高血压心肌纤维化可能与心肌组织HGF 抗纤维化作用降低有关，AT1 拮抗剂治疗可以增加心肌组织HGF 表达从而改善心肌纤维化。 2. AngⅡ促进CFbs 增殖和Ⅰ型胶原蛋白合成，HGF 抑制AngⅡ诱导的CFbs 增殖和Ⅰ型胶原蛋白合成。 3. ERK1/2、p38MAPK 和JNK 通路都参与了HGF 抑制AngⅡ诱导的CFbsⅠ型胶原蛋白合成的过程。