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背景PD是一种常见的运动障碍性疾病，严重影响病人生活质量，对于PD的人工干预显得尤其重要,但治疗目前仍无根本性突破。PD的发病机制尚不清楚，目前认为PD并非单一因素所致，而是由于多因素交互作用，最终导致黑质(SN) DA神经元大量变性、丢失。对于可能参与多巴胺能神经元发生和存活的分子的研究越来越受到重视。转录因子Engrailed1(EN1)的正常表达对于中脑DA神经元的存活乃至功能状态的维持十分重要,对DA神经元可能具有独特的神经保护作用。研究证实，PD病变机制中存在着氧化应激反应。而Keap1-Nrf2-ARE通路是抗氧化应激反应中一条很重要的通路，胞浆中Nrf2通过一种特异信号转移至核内，激活含有ARE的解毒酶类和抗氧化酶类的表达，进而保护细胞免受氧化应激反应的损伤。α-SYN是路易小体的主要成分，α-SYN在PD病人脑内神经元内的异常聚集，可能与PD病人DA神经元死亡相关。目前认为转录因子EN1、Nrf2以及α-SYN与PD的发生发展密切相关，但关于三者在PD的具体的形态学表达以及其相互关系的探讨则报道较少。目的本研究首先通过旷场试验分析PD模型小鼠的自发性行为学表现。并从影响多巴胺能神经元发育与存活的转录因子着手，应用免疫组织化学、WB法，检测PD发病机制中的可能作用分子α-SYN、转录因子EN1、Nrf2在急性期PD小鼠模型中脑区的表达及发生表达异常的先后顺序，初步探索其可能作用关系及其在DA神经元损伤中的可能作用机理，以期为进一步研究PD发病及治疗提供依据。方法选取约9周龄正常成年C57BL/6小鼠为实验对象，雌雄不限。PD模型的制作：实验侧(右侧纹状体)注射6-OHDA药液,对照侧(左侧纹状体)注射等量0.2%维生素C/生理盐水作为对照。本研究第一部分研究PD小鼠模型的自发性运动特点：将小鼠随机分为正常对照组与模型组。对照组10只，不做任何处理；模型组10只，接受PD模型手术且成活。连续七天通过5min旷场试验观察两组小鼠的行为学表现和运动轨迹，用电子秤动态监测术后小鼠体重。第二部分探讨PD可能的作用分子EN1、Nrf2和α-SYN在急性期模型小鼠中脑的表达特征：应用免疫组织化学及荧光染色，观察术后急性期特定时间点3h/6h/9h/12h/15h/18h/21h/24h时(n=6只/时间点)模型小鼠中脑EN1、Nrf2、α-SYN蛋白与DA神经元特异性蛋白TH的形态学表达变化特点，了解四者发生改变的时间特点以及是否共定位于DA神经元；并应用Western blot法检测18h/24h/3d(n=8只/时间点)中脑目标蛋白的表达量。结果1.旷场试验显示PD模型小鼠自发性运动行为改变①与对照组比较，6-OHDA注射后模型小鼠出现一过性体重减轻，并迅速恢复。②模型组小鼠术后即出现自发性持续向实验侧(右侧)的旋转行为，之后逐渐恢复，7d时旋转运动消失，运动功能基本恢复正常；5min运动轨迹异常；5min运动总量术后第1d减少，随后呈逐渐恢复的趋势，但与对照组相比无显著差异(P＞0.05)；中央区域活动时间逐渐减少，7d时较正常组出现显著性差异(P<0.05)。2. EN1、Nrf2和α-SYN在急性期PD模型小鼠中脑的表达特征⑴形态学：①与对照侧相比，实验侧中脑最前端部位的SN和腹侧被盖区(VTA) TH阳性DA神经元数目随6-OHDA注射时间的推移呈进行性减少，6h时实验侧与对照侧TH阳性细胞数量相当，12h时减少已具有统计学差异；②实验侧SN致密部DA神经元胞体中α-SYN的表达在6-OHDA注射后6h和12h都有明显增高，可见在胞浆内的聚集；③实验侧EN1阳性细胞数在注药后也随时间而逐渐减少，3h时EN1表达已有所下降，6h时减少已具有统计学意义；EN1在中脑主要表达于胞核，也少量表达于胞浆，EN1阳性细胞主要分布于中脑SN和VTA的DA神经元区域，但在其他区域的部分神经元中也有较多表达；④中脑目标蛋白EN1、α-SYN、TH的表达变化自前(近纹状体端)往后发生。⑵WB：与对照侧相比，注药后急性期3d内实验侧中脑TH蛋白的表达量无显著改变，α-SYN与Nrf2表达量明显增高。结论1.Model小鼠运动损伤和情绪的改变，表明了模型的成功。2．⑴EN1最先出现表达改变，依次是α-SYN、TH；提示α-SYN的聚集可能与DA能神经元死亡有关，而EN1的下调可能是α-SYN高表达的原因；⑵从形态学方向验证了EN1在中脑细胞浆中的表达；⑶中脑目标蛋白的表达变化自前往后发生；⑷Nrf2表达的增高，提示了氧化应激的发生与Nrf2-ARE通路状态的改变。本研究首次揭示了急性期PD模型小鼠中脑EN1、Nrf2、α-SYN和TH的表达变化特征及时间先后顺序，并初步探讨了相互之间的可能作用关系及在DA神经元损伤与PD中的可能作用。从形态学角度验证了EN1在中脑细胞浆中的表达，提示了EN1作为细胞间多肽信号的可能。希望为PD的临床治疗提供思路。