流行病学资料显示,世界范围大约有多于50%的人感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp),Hp相关性疾病慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌及胃黏膜相关性淋巴瘤的发病率非常高,是消化系非常常见的疾病。若以Up作为致病菌进行抑杀治疗,每人消耗的抗生素将是所有致病菌中最高的。抗生素带来的耐药菌株增多及毒副作用使人类难以重负。现有的治疗理念仍以抑杀Hp为主,发展的多联抗生素组合疗法尽管有效,由于Hp抗药株不断增加,再感染问题未解决,多联抗生素疗法在无休止地发展。也有人寻求Hp疫苗来防止,但胃内本身感染Hp也无法获得长期的免疫保护,开发某一成分的疫苗将难以达到目的。随着有关益生菌治疗Hp报道浮出水面,产生了一定的治疗效果。同时动物试验发现,Hp仅感染某些特殊的动物。因此,Hp作为有条件致病的理念引起人们的关注。因为若如此,可借助肠道微生态学的研究成果,通过维持和纠正胃内的菌群平衡达到预防和治疗Hp感染的目标。从治疗理念上的转变,将给Hp的治疗带来改观,长期无休止的抗生素治疗得到改善,可能仅需要短期有限地使用抗生素抑杀Hp。本研究首先用破坏正常情况下不定植Hp清洁级Balb/c小鼠胃内的菌群,接种未经驯化的Hp临床株。观察能否定植从而了解小鼠不定植Hp是否由胃内原籍菌群的作用,支持Hp作为条件致病菌的理念。从胃窦部筛选Hp的拮抗菌株并进行动物模型的治疗,为Hp作为胃内菌群一部分的理念为防治理论提供依据。方法:一、胃内菌群破坏的Hp诱导清洁级Balb/c小鼠胃炎模型1、用抗生素灌胃的方法破坏胃内菌群,得到胃内菌群失调的清洁级Balb/c小鼠。2、灌胃法接种1X10~8CFU/mlHp至小鼠胃内。3、以不破坏菌群的小鼠对照,4周和8周处死小鼠观察。4、胃黏膜匀浆涂片及培养Hp,以及快速尿素酶试验、石蜡切片Gimesa染色。5、组织病理学分析。二、拮抗Hp的胃内原籍菌益生菌分离方法。1、胃镜下取胃窦部黏膜在MRS培养基中厌氧培养分离黏膜菌株。2、体外固体微需氧培养法,筛选抑杀Hp的菌株。3、生长特性,Gram’s染色,光镜、电镜检查形态学,生化鉴定,代谢产物及遗传特性鉴定菌株。4、模拟胃环境的生存试验,抗生素敏感试验。三、拮抗Hp的胃原籍益生菌CL22治疗Hp诱导的胃炎方法1、建立Hp感染的胃炎动物模型,破坏菌群的清洁级Balb/c小鼠模型2、用CL22灌胃治疗十天,与PPI加抗生素三联治疗比较,用生理盐水作对照。3、胃内Hp检测和组织学损伤评分为疗效指标。结果:一、Hp诱导清洁级动物模型造模的结果:1、Hp能诱导胃内菌群破坏的清洁级Balb/c小鼠胃炎模型形成2、Hp的定植率:造模组接种Hp4周、8周后胃黏膜Hp的定植率均达100%,PPI加Hp对照组的定植率分别为50%和37.5%,直接给予Hp对照组的定植率分别为37.5%和25%.生理盐水对照组为O.造模组与各组比较有显著性差异(p＜0.05)。3、病理组织学结果:接种Hp后4周、8周,造模组小鼠胃黏膜均出现慢性炎症改变,且炎症程度随时间增加而加重,胃黏膜炎症评分明显高于PPI加Hp对照组和单用Hp对照组(p＜0.05)。二、拮抗Hp的胃内原籍菌益生菌CL22的分离结果1、从胃黏膜组织分离的CL22菌株经形态学、生化及遗传特征的鉴定确定为粪肠球菌。GC比例为36.9。2、CL22菌株培养上清夜对Hp的体外抑菌试验有明显的抑菌作用,而其高压灭菌上清夜和过滤除菌的上清液对Hp无抑制作用。3、CL22菌株耐酸耐胆汁试验显示其在pH为2.0的酸性环境下生长良好;在含3%胆汁盐的MRS液体培养基中生长良好,说明CL22菌株具有耐酸耐胆汁的作用。主要代谢产物为乙酸。三、CL22治疗Hp诱导的小鼠感染性胃炎的结果1、Hp的根除率:CL221治疗组Hp的根除率为70%,PPI加抗菌素三联治疗对照组为80%,两组比较无显著性差异(p＞0.05);2、病理组织学结果:CL22治疗组和PPI加抗菌素三联对照组治疗后胃黏膜的炎症程度明显减轻,胃黏膜慢性炎症损伤积分与模型对照组比较有显著性差异(p＜0.05);但:CL22治疗组和PPI加抗菌素三联对照组两组之间比较无显著性差异(p＞0.05)。3、Hp定植积分结果:CL22治疗组和PPI加抗菌素三联两组之间比较无显著性差异(p＞0.05)。对照组治疗后Hp定植积分与模型对照组比较有显著性差异(p＜0.05)。,结论:1、Hp能诱导胃内菌群破坏的Balb/c小鼠胃炎。说明小鼠胃黏膜菌群正常时能够阻止Hp的定植。用该法可以建立Balb/c小鼠Hp相关性胃炎的模型。2、从人胃黏膜内成功分离到CL22粪肠球菌,具有抑杀Up的作用,为胃内的原籍益生菌。3、CL22可有效治疗Hp感染的Balb/c小鼠的胃黏膜炎症,疗效与PPI加抗生素三联治疗相似。