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本文考察了长白楤木样品液的制备工艺;同时对指标性成分的提取、水解和高效液相色谱测定其含量的方法进行了研究;并对不同产地植物中指标性成分的含量进行了测定;采用高效液相指纹图谱技术对长白楤木药材原植物进行了分析,并采用薄层色谱技术对不同产地的长白楤木色谱图进行了初步研究;结果表明:
1.超声法提取槐木皂苷较回流法和浸提法具有提取时间短(每个样仅用60 min),提取率高、提取温度较低(<40℃)等优点;影响其提取率的主次因素为:超声时间>乙醇浓度>超声功率>间隙超声时间比;最佳提取工艺为:50%乙醇,超声功率1200W,间隙超声时间比为0.5:1,每次超声时间30 min。
2.采用D101大孔树脂初步纯化长白楤木皂苷的除杂能力较强,长白楤木皂苷富集于50%乙醇洗脱液部分,其吸附长白楤木皂苷的吸附容量为3.56 mg·g<-1>,通过吸附和纯化后长白楤木皂苷洗脱率在90%以上,50%乙醇洗脱液干燥后浸膏中长白楤木皂苷纯度可达48.9%,精制度160.3%。
3.对长白楤木皂苷提取液采用0.5、1.0、1.5、2.0 mol·L<-1>的H<,2>SO<,4>水解相同时间(5h)后测定齐墩果酸含量发现:0.5 mol·L<-1>的H<,2>SO<4>水解,齐墩果酸的测得量最低,1.5mol-L<-1>与2.0 mol·L<-1>的H<,2>5O<,4>液水解,齐墩果酸的测得量高而差异不显著,故采用1.5 mol·L<-1>的H<,2>SO<,4>水解样品。同时对水解时间的研究发现:水解4h时齐墩果酸含量高,与5 h相比差异不显著,因此水解时间确定为4h。
4.对高效液相色谱测定长白楤木齐墩果酸含量的方法研究表明:采用DiamonsilC<,18>柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱:0.0~5.0 min,60%A;5.0~8.0min,60%~80%A;8.0~23.0 min,80%A;23.0~33.0 min,90%A;33.0~38.0min,90%~95%A,检测波长:215 nm,流速:1.0 mL·min<-1>,柱温25℃,进样量20μL,齐墩果酸可与其它成分完全分离。0.0058~0.58 mg·mL<-1>内峰面积与质量浓度呈良好的线性关系;其方程为Y=7439X-87.61(r=0.9997);平均回收率为98.8%(RSD=1.0%,n=5)。仪器精密度高,方法重现性好。
5.产地不同齐墩果酸含量不相同:黑龙江牡丹江、亚布力、方正等地的齐墩果酸含量最高,吉林梅河口、延边、磐石、左家、桦甸的次之,辽宁沈阳、本溪、营口含量最低。
6.应用高效液相色谱,Diamonsil C<,18>柱,水与乙腈梯度洗脱,检测波长:215 nm,流速:1.0 Ml·min<-1>,柱温25℃,进样量20μL。分别对长白楤木根皂苷元及皂苷进行了指纹图谱研究,建立了各自的标准指纹图谱,结果表明:同种植物不同产地相似度高。因此可将其作为长白楤木木药材专属性的指纹图谱。
7.对长白楤木皂苷成分薄层色谱图进行了初步研究,结果表明:应用普通硅胶G预制板,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(80:10:30:1)为展开剂,可以到10个较为清晰的紫红色斑点,且不同产地的图谱具有一定的相似性。