鼻咽癌PCDGF表达及siRNA对HNE-1细胞株增殖的影响

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背景:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是中国南方常见的一种头颈部恶性肿瘤,其恶性程度高,具有强大的侵袭转移能力,且发病部位隐蔽,早期诊断难。畸胎瘤细胞源性生长因子(PC cell-derivedgrowth factor,PCDGF)又名progranulin,acrogranin,属于生长因子家族:颗粒蛋白(granulin,GRN)中的一员,其在多种肿瘤中高表达,如乳腺癌[2][3],卵巢癌[4],食管鳞状细胞癌[5],非小细胞肺癌[6],多发性骨髓细胞瘤[7]等,参与肿瘤的发生、增殖、浸润、转移。因此沉默肿瘤细胞中PCDGF表达有助于防治肿瘤的增殖转移。RNAi是一种抑制特定基因产物表达的有效方法,是由双链RNA(dsRNA)介导的特异性降解相应序列的mRNA,导致靶基因的沉默[8]。本研究采用RNA干扰技术,沉默PCDGF表达,探讨其对鼻咽癌细胞株HNE-1生物学行为的影响,以期为鼻咽癌的诊断与治疗提供实验室依据。目的:探讨畸胎瘤细胞源性生长因子(PC cell-derived growthfactor,PCDGF)在人鼻咽癌中的表达,并研究其表达与患者临床病理特征之间的关系。构建针对PCDGF特异性的小干扰RNA(smallinterferirng RNA,siRNA),研究其对鼻咽癌HNE-1细胞增殖的影响。方法:采用免疫组织化学的方法检测53例鼻咽癌,28例鼻咽慢性炎症组织中PCDGF蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理资料对结果进行统计分析;同时采用荧光免疫细胞化学法检测人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞PCDGF表达。根据PCDGF基因设计合成两条siRNA,利用lipofectamineTM2000转染鼻咽癌HNE-1细胞,并在荧光显微镜下检测转染效率。通过real-time PCR、Western blot检测转染后细胞PCDGFmRNA和蛋白表达,采用MTT检测转染后细胞的生长增殖情况,FCM法检测细胞周期分布。结果:53例鼻咽癌组织中PCDGF阳性表达率为82.02%(44/53),28例鼻咽部慢性炎症组织中阳性率为17.86%(5/28),两组间差异有统计学意义(P<0.01)。鼻咽癌组织中PCDGF的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病理分期密切相关(P<0.05),而与性别无关(P>0.05)。2条重组质粒均能特异性的抑制PCDGF mRNA和蛋白的表达,其中siRNA-1的沉默效率最高。转染48h后,HNE-1细胞中PCDGF mRNA和蛋白表达水平分别下调59.3%和57.6%,细胞增殖抑制率为(37.07±12.4)%,siRNA-1组G0/G1期细胞增多, S期细胞数量明显减少(P<0.05),细胞周期被阻滞于G1期。结论:特异性siRNA能够有效沉默PCDGF基因表达,并显著抑制鼻咽癌HNE-1细胞增殖。
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