论文部分内容阅读
目的：苦马豆素是黄芪属和棘豆属等有毒植物的主要毒素,可引起以运动和繁殖障碍为主的中毒症状。本试验以妊娠Balb/c小鼠为试验动物,灌服苦马豆素,观察卵巢病变,检测生殖免疫相关的细胞因子,探究苦马豆素对妊娠小鼠Th1/Th2细胞平衡和生殖免疫关键细胞因子的调控作用,推测苦马豆素致山羊流产的免疫因素,为苦马豆素致流产的机制研究奠定基础。方法：本试验以8周龄Balb/c小鼠作为试验动物,按照雄雌比为1：3的比例进行合笼交配。将妊娠小鼠分为5组,自小鼠妊娠第8天起,分别按照剂量0、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/kg/d灌服苦马豆素溶液。妊娠第20天,解剖小鼠,采集卵巢,制作病理切片,观察卵巢细胞的病理变化；采集血清,采用ELISA技术检测各组小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-y浓度,分析苦马豆素对血清中生殖免疫关键的细胞因子的调控作用；采集脾脏,提取总RNA,通过RT-qPCR检测脾脏中IL-1β、IL-4、 IL-10、FN-γ的mRNA基因水平,分析苦马豆素对这些细胞因子转录过程的调控作用；分离外周血淋巴细胞,用PMA和粒子霉素刺激T细胞,采用三色法标记Th1/Th2细胞,用流式细胞仪检测Th1/Th2细胞亚群比例,分析苦马豆素对外周血Th1/Th2细胞亚群的作用。结果：病理切片显示,苦马豆素剂量在0.2 mg/kg/d时,即观察到卵巢中有少量的细胞出现空泡化现象,随着剂量的增加,空泡化现象更加明显,并伴有细胞核肿胀、固缩,细胞坏死等现象,说明孕小鼠灌服SW后出现苦马豆素中毒的典型病变。对小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ的浓度进行测定,发现苦马豆素可显著提高IL-1β、TFN-α和IFN-γ的浓度,且随着剂量的增加,浓度有上升趋势,呈现正相关性；灌服苦马豆素水溶液后,IL-4和IL-10的血清浓度有所下降,其中苦马豆素剂量在0.2 mg/kg/d时,IL-4的血清浓度最低,随着剂量的增加,IL-4的浓度有所上升,但仍显著低于对照组,IL-10的浓度随着剂量的增加而降低,呈现负相关性。对外周血淋巴细胞中Th1/Th2细胞亚群进行分析,发现灌服苦马豆素后,小鼠的Thl型细胞的数量比有所上升,Th2型细胞的比例下降,Th1/Th2细胞亚群平衡向Thl型细胞因子倾斜。结论：苦马豆素具有显著的免疫调节作用,可促进孕小鼠Thl型细胞增殖和分化,增加IL-1β、TNF-γ和IFN-α的血清浓度,抑制Th2型细胞的增殖分化和细胞活性,降低IL-4和IL-10的细胞因子水平。推测苦马豆素引起的妊娠动物生殖免疫紊乱可能是造成流产的原因之一。