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副鸡嗜血杆菌是鸡传染性鼻炎(IC)的病原,该菌培养条件苛刻、分离困难,发病鸡病症不典型,加大了临床诊断和实验室检测的难度。本研究旨在研制出该细菌种特异性单抗,并在此基础上建立起特异性较强、敏感性较好的检测方法。本研究以副鸡嗜血杆菌A型Hpg14和C型株Hpg668经0.01%硫柳汞灭活后作为抗原,4次免疫8周龄BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。通过间接ELISA和直接平板凝集试验进行筛选,将获得的阳性细胞株进行亚克隆,筛选稳定分泌单克隆抗体的细胞株。经3次亚克隆后共获得9株针对副鸡嗜血杆菌特异性单抗,其中8株是针对副鸡嗜血杆菌种特异性的,分别命名为3D3、1D6、5C9、4C3、4G11、6G2、5D2和1E8;1株是针对该细菌C型的,命名为1F5。以上单抗腹水的间接ELISA效价在6×10~3～1×10~5之间,直接平板凝集试验效价在23～26。免疫球蛋白亚类试剂盒鉴定结果表明:4C3、4G11和6G2属于IgG1亚类,1E8为IgG3亚类,3D3、5C9和1F5属于IgM亚类,而1D6属于IgG2a亚类。特异性实验结果表明:该9株单抗只与副鸡嗜血杆菌反应,而不与巴氏杆菌、禽嗜血杆菌、放线杆菌发生交叉反应,显示出很好的种特异性;单抗1F5与A型的副鸡嗜血杆菌有轻微交叉反应,显示出较好的型特异性。9株单抗与4个已分型的菌株和3个未定型的分离株共7株副鸡嗜血杆菌的排谱反应表明:3D3、1D6、5C9、4C3、4G11、6G2、5D2和1E8有较好的广谱性;1F5能与非抗原的C型菌株发生反应。本研究在研制出副鸡嗜血杆菌的特异性单克隆抗体的基础上建立了能检测副鸡嗜血杆菌特异性抗体的阻断ELISA方法,并应用此方法对8种常见病原体的阳性血清及多份免疫鸡、人工感染鸡血清和阴性血清进行了检测,结果证明,本方法具有较好的特异性和敏感性,而且操作简便、快速,是一种适用于鸡传染性鼻炎的诊断、流行病学调查、检疫和监测的有效方法。这为有效控制该病提供了必要的生物材料和方法。