【摘 要】
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在羊栖菜野生资源日益匮乏,市场需求量日益增长的情况下,羊栖菜大规模人工养殖成为必然趋势,同时也带来众多生产问题。为了实现羊栖菜优良品种保存及跨区域运输养殖,评估海水盐度变化对羊栖菜幼体生长的影响。本研究以羊栖菜受精卵为研究对象,采用低温和超低温两种保存方案对羊栖菜受精卵进行保存,通过对不同冷冻保护剂的分析优化,以期获得较好的冷冻保存方法及冷冻保存剂。同时研究了羊栖菜幼体对不同海水盐度梯度胁迫的光合
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在羊栖菜野生资源日益匮乏,市场需求量日益增长的情况下,羊栖菜大规模人工养殖成为必然趋势,同时也带来众多生产问题。为了实现羊栖菜优良品种保存及跨区域运输养殖,评估海水盐度变化对羊栖菜幼体生长的影响。本研究以羊栖菜受精卵为研究对象,采用低温和超低温两种保存方案对羊栖菜受精卵进行保存,通过对不同冷冻保护剂的分析优化,以期获得较好的冷冻保存方法及冷冻保存剂。同时研究了羊栖菜幼体对不同海水盐度梯度胁迫的光合响应特性,为羊栖菜人工养殖提供技术支持和理论参考。主要研究结果如下:1、羊栖菜冷冻保护剂效果最佳为:海水+0.01M HEPES+10%DMSO,4℃条件下,低温能抑制及减缓羊栖菜受精卵假根的生长,羊栖菜受精卵不适宜长时间4℃低温冷藏,冷藏时间超过24 h后羊栖菜受精卵的存活率、死亡率均大幅度增加,羊栖菜受精卵的假根率达到最大。当冷藏时间达到72 h时,羊栖菜受精卵培养48h后的死亡率达到90%。超低温冷冻保存时玻璃化冷冻法保存的羊栖菜受精卵复苏初始存活率均可达65%~80%,程序冷冻法则只有30%~60%。其中程序冷冻法保存羊栖菜受精卵时,试剂一(海水+0.01M HEPES+10%DMSO)、试剂三(海水+0.01M HEPES+10%DMSO+10%Sorbitol)对受精卵保存效果较好,7天复苏培养后存活率达到15%左右;玻璃化冷冻法保存羊栖菜受精卵,试剂一对羊栖菜受精卵的保存效果较好,经过7天复苏培养羊栖菜受精卵存活率可以达到20%。同时超低温冷冻保存羊栖菜受精卵冷冻损伤不可避免,玻璃化冷冻法保存的羊栖菜受精卵生长发育优于程序冷冻法保存的羊栖菜受精卵。2、海水盐度过低或过高均会影响羊栖菜幼体的光合作用,在盐度20‰条件下,羊栖菜幼体的光合作用受到的抑制影响较小,羊栖菜幼体对海水低盐度条件有一定的耐受性。当海水盐度过低时(15‰),羊栖菜幼体光合作用受到明显抑制。高盐45‰条件下,羊栖菜幼体受到高盐胁迫损伤,羊栖菜幼体光合活性和无机碳利用受到显著抑制影响。羊栖菜对盐度变化的耐受性会随时间变化。短时间海水盐度变化,羊栖菜的光合作用受到的影响较小,各盐度羊栖菜幼体的色素含量(Chl-a、Chl-c、Car)、光能电子传递速率(r ETRmax)、光能利用效率(Fv/Fm)出现先降低后升高的曲折变化。在长时间盐度变化条件下,过低(15‰)或过高盐度条件(45‰)均会抑制羊栖菜幼体的光合作用,其光能电子传递速率(r ETRmax)、有效光化学效率(α)、光合放氧速率(Pm)、光合固碳速率(Vmax)均显著降低,过高盐度通过阻碍羊栖菜幼体光合色素合成等胁迫其光合作用过程。总结来看,羊栖菜受精卵比较脆弱,冷冻保存选用试剂一作为冷冻保护剂进行保存效果比较好,经过保存的羊栖菜受精卵应当考虑羊栖菜受精卵受到的冷冻损伤;羊栖菜受精卵4℃保存应当控制在24 h以内,超低温长期保存则应该选用玻璃化冷冻法进行冷冻保存。此外,实际生产中,当产生过高或过低盐度变化时,应当及时做好羊栖菜的防低盐或高盐胁迫处理,防止长时间的盐度变化影响羊栖菜特别是其幼体的生长。
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