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盾壳霉(Coniothyrium minitans)是引起作物菌核病的核盘菌(Sclerotinia sclerotirium)的重要寄生真菌,在世界范围内广泛存在,是菌核病的一种重要生防菌。盾壳霉可以在pH2-12的环境下生长,说明本身具有耐碱的特征。本论文主要目的在于获得耐碱缺陷型盾壳霉,从中克隆耐碱相关的基因,为培育耐碱作物积累基因材料。实验自实验室前期构建好的盾壳霉T-DNA插入突变体库筛选获得了4个耐碱缺陷型突变体,并对它们的生物学特性进行了研究。在筛选出的突变体基础上,利用Tail-PCR技术扩增目的片段,同时对所获得的目的片段进行了克隆和鉴定。实验共从4300个插入转化子中筛选到ZS-1T2613、ZS-1T2979、ZS-1T3446和ZS-1T20266四个突变体,插入突变的频率约9.3×10-4。他们在pH为9.0的PDA培养基上不能生长,其中突变体ZS-1T3446在pH为8.0的PDA培养基上就已不能生长。4个突变体与ZS-1菌株相比较,生长速度和产抗生素能力差异显著。而在产孢能力方面,除了突变体ZS-1T2979不产孢、菌落为白色外,其他3个突变体和ZS-1无明显差别。说明该突变体T-DNA插入到了一个表型控制的功能基因。通过对4个突变体的Tail-PCR扩增和电泳检测,结果显示只有突变体ZS-1T2979的L端和随机引物扩增出目的片段,且第二次扩增与第三次扩增的片段正好相差约150bp(既L2与L3的差距),说明此片段可能是耐碱功能相关基因。