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目前,败血症、脓毒症、医源性感染和多器官功能衰竭综合征(MODS)等并发症仍是危重患者死亡的主要原因。由于耐药微生物数量的增长、老年人口增加及免疫力低下病人数增加等原因,致使严重败血症的死亡率仍在28%到50%或更高。降钙素原(PCT)现已被FDA认可作为脓毒症检测指标。对于在重症监护室(ICU)的手术病人和新生婴儿而言,感染导致败血症、脓毒症等的存在将带来较大风险。因此,对这些感染并发症进行早期诊断及治疗非常重要。近年研究发现,PCT与常用的血培养、CRP、IL-6等感染指标相比具有一定的优越性,对PCT的连续性检测有助于指导广谱抗生素的使用,减少抗生素滥用,并缩短抗感染治疗疗程。本研究使用原核系统表达重组人PCT蛋白,利用硫酸铵沉淀、His-taq镍柱和分子筛层析柱纯化重组蛋白后,重组PCT蛋白纯度可达到99%以上,经质谱法、间接ELISA法及Western blot对重组蛋白的性质进行分析和鉴定,确定纯化的重组蛋白为重组人PCT蛋白。重组PCT蛋白与进口 PCT多克隆抗体有良好的免疫反应,说明其可作为制备单克隆抗体的免疫抗原。以纯化后的重组人PCT蛋白为抗原,对BALB/c小鼠免疫,免疫小鼠的血清效价用间接ELISA法进行检测。结果显示,经过4次免疫后,小鼠血清效价百万倍稀释后为阳性,达到融合条件。融合前四天采用脾脏免疫和尾静脉注射加强免疫,取免疫小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,制备杂交瘤细胞,间接ELISA法对阳性克隆进行筛选。筛选获得的阳性克隆可用有限稀释法进行克隆化,经4次亚克隆后,共筛选到7株能稳定、高效分泌抗降钙素原单克隆抗体的细胞株。本研究对抗PCT抗体的亚型、相对亲和力和识别表位进行了鉴定。相对亲和力均较高,抗原表位主要集中在三个表位。将得到的7株抗体用于HRP标记的双抗夹心ELISA法和FITC标记的荧光免疫层析方法配对,初步建立临床快速诊断方法。ELISA平台筛选获得较好的抗体对为8E6-HRP-2D3,8E6-HRP-7F9,2D3-HRP-4G9,荧光免疫层析平台得到的最优抗体对为7F9-FITC-2D3。将HRP标记配对的灵敏度较高的抗体对8E6-HRP-2D3进行临床检测验证,三组临床样本检测值与医院临床值相关系数分别达到0.998、0.974和0.976。为今后开发具有自主知识产权的PCT诊断试剂盒奠定了基础。