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目的:通过测定衰老模型大鼠血清免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）的活性变化,脾脏组织补体C3（C3）、补体C4（C4）、白介素-10（IL-10）、白介素-6（IL-6）,干扰素-Y（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）活性的变化,脾脏组织干扰素-Y基因（IFN-γmRNA）、白介素-10基因（IL-10mRNA）的基因表达影响,以及衰老模型大鼠脾脏指数的变化情况。欲从免疫学角度进行研究,探讨灵龟八法开穴灸对免疫相关指标的影响,为灵龟八法按时开穴灸延缓衰老提供更多的实验依据。方法:将43只SD大鼠随机分为空白组（A组）12只,预用造模模型大鼠31只。预用造模模型大鼠采用腹腔内注射D-半乳糖500mg.kg-1,每日1次,共60天,制备亚急性衰老大鼠模型。筛选后将造模成功的24只大鼠,按随机数字表法分为模型组（B组）、灵龟八法治疗组（C组）,每组12只。造模结束后,空白组、模型组不予治疗,灵龟八法治疗组衰老大鼠予灵龟八法按时开穴灸治疗4周。实验结束后,大鼠腹主静脉取血,分离血清,采用酶联免疫法测定衰老大鼠血清IgM、IgA、IgG的活性变化。采血后立即处死大鼠,在冰台上取脾脏组织,称重计算脾脏指数。称重后,用手动匀浆器制备脾匀浆,采用酶联免疫法测定衰老大鼠脾脏组织C3、C4、IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-a的活性变化;用RT-PCR检测脾脏组织IFN-γmRNA、IL-10mRNA基因表达情况。结果:（1）灵龟八法治疗组的脾脏指数,血清IgM、IgA、IgG含量,脾脏组织C3、C4、IL-10含量,IL-10mRNA基因表达量均明显大于模型组（P<0.05）;灵龟八法治疗组与空白组相比减少（P<0.05）,差异有统计学意义。（2）灵龟八法治疗组脾脏组织IL-6、TNF-a、IFN-γ含量,IFN-γmRNA表达量均显著少于模型组（P<0.05）;灵龟八法治疗组与空白组相比显著增加（P<0.05）,差异有统计学意义。结论:（1）灵龟八法开穴灸有效地增加了衰老模型大鼠的脾脏指数,增加了衰老模型大鼠的血清IgM、IgA、IgG,脾脏组织C3、C4、IL-10的含量、增加了IL-10mRNA的基因表达量。说明灵龟八法开穴灸促进了免疫器官脾脏的发育,增强了机体的免疫功能和补体系统,有效调节了机体的防御功能,灵龟八法开穴灸对D-半乳糖引起的亚急性炎症反应起了一定的保护作用,实现了延缓衰老的目的。（2）灵龟八法开穴灸减少了脾脏组织中IL--6、IFN-γ、TNF-a的含量、减少了IFN-γmRNA的基因表达量。说明灵龟八法有效调节了衰老模型大鼠的炎症因子,抑制了免疫炎性反应又调节了免疫平衡,减轻了由D半乳糖制作衰老模型所致的炎症反应,达到延缓衰老的效果。