亚氨基二乙酸修饰的共轭聚合物荧光标记组氨酸标签蛋白

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共轭聚电解质由于其良好的吸光性、高量子产率、信号放大功能以及低生物毒性而被广泛研究。过去的几十年中,通过向共轭聚电解质侧链引入带电基团使其能和带相反电荷通过正负电荷相互吸引发生作用,拓宽了共轭聚电解质作为化学生物传感器以及细胞成像材料的应用。但是非特异性相互作用极易受干扰,这样就使共轭聚电解质识别靶标的选择性和灵敏性大打折扣,所以构建能特异性识别目标的新型共轭聚电解质有极大的意义。IDA和NTA常被用于IMAC用来提纯组氨酸标签蛋白,它们可以与镍离子络合并进一步去结合组氨酸标签。因此,已有一些接枝有IDA/NTA的小分子探针和表面修饰的荧光纳米颗粒被运用于固化以及提纯重组蛋白。而相较于荧光小分子或纳米颗粒,共轭聚合物有着更好的光物理性质以及生物相容性,所以,本论文设计并合成了以聚撑苯乙炔为主链,在侧链中引入IDA的负电荷共轭聚电解质PPEIDA,并对其进行了如下具体研究:(1)对其与金属离子相互作用进行了分析,在甲醇溶液中金属离子对PPEIDA的淬灭效率要远高于在水溶液中,这是一个反常而有趣的现象,也正因为在水溶液在镍离子对PPEIDA的淬灭效率并不高,我们可以进一步利用依然保持较强荧光的PPEIDA与镍离子的络合物进行接下来的实验。(2)利用FA和FRET验证了PPEIDA-Ni2+-His-Protein体系的可行性。FA实验中,PPEIDA溶液只有在有镍离子存在时加入带有组氨酸标签的蛋白才会有荧光各向异性的升高,镍离子或者组氨酸标签的缺席都不能使各向异性有所改变;FRET实验中,也只有在镍离子和组氨酸标签同时存在时,PPEIDA才能向组氨酸标签红色荧光蛋白进行荧光共振能量转移。FA和FRET实验均说明了镍离子以及组氨酸标签对于此体系生效的不可或缺性。(3)实际应用PPEIDA-Ni2+-His-Protein体系。在Western Blot实验中利用PPEIDA与镍离子络合物替代一抗和二抗对组氨酸标签蛋白进行成像,省去了众多繁复的步骤,且不再依赖于专门的显影设备,大大节省了Western Blot实验的时间和成本。进一步的,我们还将此体系运用至细胞成像,成功地用PPEIDA与的镍离子络合物荧光成像Hela细胞表面的组氨酸标签蛋白。
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