免疫乳及其抗炎因子研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:hesur
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含有特异性乳抗体(milk antibody)的乳称为免疫乳(immune milk),免疫乳中除含有乳抗体外,还含有机体免疫应答过程中产生的一些淋巴因子,免疫乳中的抗炎因子就是其中的一种。本研究对免疫乳及免疫乳中抗炎因子进行了系统的研究。主要研究结果如下: 以24株人肠道病原菌(包括病原性大肠杆菌12株、沙门氏菌8株、志贺氏菌3株、小肠结肠炎耶尔森氏菌1株)作为抗原,对乳牛进行系统免疫,免疫乳与非免疫乳乳中IgG含量无显著差异。系统免疫并不增加乳中IgG的含量,但IgG的抗体特异性大大增强,所得的免疫初乳(immune colostrums,20mgIgG/ml)中乳抗体对24种不同病原菌的凝集价为28-212,为普通初乳(regular colostrums,20mgIgG/ml)中乳抗体凝集价的32-256倍;免疫常乳(immune milk)中乳抗体对24种不同病原菌的凝集价为25-28,为普通乳(regular milk)中乳抗体凝集价的8-128倍。 免疫乳中的IgG较普通乳中的IgG可显著抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长。免疫乳中特异性的IgG对大肠杆菌和沙门氏菌所致小鼠腹泻具有很好的保护作用,而普通乳中非特异性的IgG则无此作用,这是由于IgG的特异性所决定。 以免疫乳作为原料制备的免疫乳粉(immune milk powder)具有调节肠道菌群的作用。免疫乳粉较普通乳粉可显著增加小鼠肠道中双歧杆菌和乳杆菌的数量以及肠道中乳酸和己酸的含量,同时可显著降低小鼠肠道中肠球菌、大肠杆菌及产气荚膜梭菌的数量。 免疫乳粉可显著增强小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能,提高巨噬细胞的吞噬能力和NK细胞的活性。 免疫乳粉对角叉菜胶和甲醛致炎引起的大鼠足趾肿胀具有显著的抑制作用,同时可显著降低炎性组织中PGE2的含量。免疫乳粉对小鼠肉芽肿也具有显著的抑制作用。 以免疫乳粉作为添加剂制备的婴儿免疫乳粉LD50>10g/kg;Ames试验及小鼠骨髓微核试验和小鼠精子畸变试验表明婴儿免疫乳粉无致畸变作用。大鼠30天喂养试验表明,婴儿免疫乳粉对大鼠生长无不良影响,大鼠血液指标正常,病理学检查未见任何病变。 IgG的稳定性研究表明,在pH4-10的范围内,IgG十分稳定,当pH<4或pH>10,IgG的稳定性下降;IgG可耐受1.0M以下的盐酸胍,当盐酸胍浓度大于1.0M时,IgG的分子稳定性下降。一定浓度的蔗糖对IgG的酸碱稳定性、热稳定性及分子稳定性具有很好的保护作用。免疫乳中IgG的热变性属于1.2级反应。在65℃、70℃、75℃、及80℃条件下IgG变性的D值分别为769.23min、185.18min、21.55min和5.09min,在此温度范围内IgG变性的Z值为6.69℃,表观活化能为345.69KJ/mol。乳品工业中常用的LTLT和HTST巴氏杀菌对免疫乳中IgG活性影响较小;若采用UHT工艺,IgG全部失去活性。 采用中空纤维超滤器(分子截量为100kd)从免疫初乳乳清中分离IgG,IgG的收率为94.15%;采用盐析-超滤联合法进行分离,可进一步提高IgG的纯度,可达80-90%,但IgG收率下降,为80.71%。 以免疫乳作为原料制备干酪,采用超滤法从干酪生产的副产物----免疫乳清(immunemilk whey)分离制备含有特异性乳抗体的乳清蛋白浓缩物(IWPC),IgG的收率为90%以张和平 摘要2001年5月上,IWPC得率为 1二%(W/V),其中蛋白质含量为 40.44%,IgG含量为 3.95%,IgG占总蛋白的 9.76%。制得的 IWPC中乳抗体对 24种不同病原菌的凝集价为 640-10240,为非免疫 WPC的 16-slZ倍。 以免疫乳作原料制备免疫酸乳(immune milk yoghurt),兔疫乳中特异性的 lgG对乳酸菌生长没有影响,同时乳酸菌的发酵不影响IgG的活性。制备的免疫酸乳中乳抗体凝集价为128,普通酸乳中乳抗体活性几乎测不到。 采用超滤、离子交换色谱及凝胶过滤色谱从免疫初乳中分离纯化出了抗炎因子(Ant-inflammatory factor,A叼,并对 AIF的抗炎特性进行了研究。研究结果表明:()AIF对角叉菜胶和甲醛所致的大鼠足趾炎症具有十分显著的抗炎效果,同时可显著降低大鼠足趾炎性组织中PGEZ的含量。(2)小鼠耳壳肿胀模型试验结果表明,AIF的最佳作用时间为致炎前0.5小时,之后随时间延长,AIF的抗炎效果逐渐减弱。(3)AIF抗炎效果的最佳给药途径为静脉注射(i.V),依次分别为皮下注射(i.S)>腹腔注射(i.p)>口服一.p),i.S、i.P、。p途径的抗炎效果分别为iJ途径的6795%、61.sl%和54.69%。(4)无论是口服还是注射,AIF都可显著降低小鼠毛细血管的通透性。 根据本研究结果,可以推断AIF的抗炎机理如下: (l)AIF的抗炎作用以抑制白细胞参与的炎症细胞期反应(即炎症第二期反应)为主。AIF可以抑制嗜中性白细胞由血液运行到炎症部位,从而降低了由嗜中性白细胞介导的毛细血管通透性。 (2)AIF对炎症的非细胞期反应(即炎症的第一期反应)也有一定的抑制作用,可降低炎性组织中炎性介质如PGEZ的含量。 AIF对热刺激和醋酸刺激造成的疼痛具有显著的镇
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