RGD接枝聚(羟基乙酸-L-赖氨酸-乳酸)/PDLLA/β-TCP复合材料用于周围神经缺损修复的研究

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本文研究了一种用于桥接周围神经缺损的新型复合膜材料。首先合成了RGD接枝的高分子聚(羟基乙酸-L-赖氨酸-乳酸)(简称PRGD),通过物理共混一定比例的聚乳酸(PDLLA)、β-磷酸三钙(β-TCP)制备了PRGD/PDLLA/β-TCP复合膜。通过体外细胞培养和体内动物实验对其进行生物学评价,探讨其在神经修复领域中的应用。 以Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸与溴乙酰溴为起始原料,经酰化,关环两步反应,成功合成单体3S-[4-(苄氧羰基氨基)丁基]-吗啉-2,5-二酮,该单体纯化后与D,L-丙交酯开环共聚合生成聚(羟基乙酸-Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸-乳酸),对其进行了FT-IR,1H-NMR和13C-NMR表征,其组成可根据单体3S-[4-(苄氧羰基氨基)丁基]-吗啉-2,5-二酮和D,L-丙交酯投料比的不同在较大范围内调节。以Pd/C为催化剂,将聚(羟基乙酸-Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸-乳酸)加氢脱保护,得到带有活性侧氨基的高分子聚(羟基乙酸-L-赖氨酸.乳酸),1H-NMR测试结果显示保护基团苄氧羰基已经脱除。在侧氨基上用化学法偶联接枝促细胞黏附多肽RGD,氨基酸测试(AAA)结果表明接枝量为12.7~14.3μmol/g。 将PRGD和PDLLA以1:1的质量比配制成浓度为10%的乙酸乙酯溶液,混入适量β-TCP粉末,磁力搅拌作用下均匀分散,采用溶液浇注法在室温下制备PRGD/PDLLA/β-TCP复合膜。由静态水接触角测试评价材料的亲/疏水性,其结果显示PRGD/PDLLA/β-TCP复合膜亲水性较聚乳酸有显著改善。 采用直接接触法将材料与RSC96雪旺细胞共培养,研究RGD接枝聚(羟基乙酸-L-赖氨酸-乳酸)与雪旺细胞的相容性。扫描电镜下观察细胞在材料表面的黏附与铺展情况,结果表明RGD接枝聚(羟基乙酸-L-赖氨酸-乳酸)/PDLLA复合材料与雪旺细胞良好的亲和性,适宜用于神经修复领域。 采用大鼠坐骨神经缺损模型对PRGD/PDLLA/β-TCP复合材料进行了体内生物学评价。自体神经移植作为对照组,用PDLLA、PRGD/PDLLA/β-TCP两组材料对大鼠10mm的坐骨神经缺损进行了导管桥接手术,通过大体观察、测定三头肌湿重恢复率、电生理检测,亚甲蓝染色,电镜观察等方法分别于术后3个月和6个月观察神经再生的情况。结果显示该复合材料具有良好的生物相容性及促进缺损神经再生的能力,其修复效果显著优于聚乳酸,与自体神经移植组相当。
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