副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病，由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPs)所引起猪的浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的内源性继发感染性疾病。近些年，随着全球养猪业的发展，该病在猪病的发生中起着越来越重要的作用，给养殖户带来巨大的经济损失。本课题对近两年从四川地区所分离的HPs菌株，进行了HPs疫苗用菌株的筛选、疫苗用菌株的生长特性和HPs二价灭活苗的研究，为四川地区副猪嗜血杆菌病的基础研究、预防和控制奠定基础。主要研究内容如下:　　1.HPs疫苗用菌株的筛选　　选择四川HPs流行优势血清型5型、13型分离株，作为HPs疫苗筛选菌株。首先，根据各分离株来源地猪的饲养管理、发病情况和临床症状等，选择4株血清5型分离株和4株血清13型分离株作为疫苗制备初步候选菌株。然后，根据小白鼠感染实验，测定各菌株的毒力与免疫原性，从中分别选出毒力较强，免疫原性较好的2株，即血清5型分离株MC-203株、GA-502株和血清13型分离株XJ-103株、MS-301株。最后，根据仔猪感染实验，最终筛选出毒力较强，免疫原性较好HPs分离株MC-203株（血清5型）和XJ-103株（血清13型）作为HPs疫苗候选菌株。　　2.HPs疫苗候选株的生长特性研究　　进行HPs疫苗候选株MC-203株（血清5型）和XJ-103株（血清13型）的生长特性研究。首先，筛选了HPs生长所需的固体培养基;结果，HPs在TSA上生长最好，培养18h左右就能长出。其次，优化了影响HPs生长的NAD浓度和犊牛血清浓度;结果，HPs在含有15μg/ml的NAD、5％小牛血清的TSB中生长最好。最后，测定了疫苗候选株MC-203株和XJ-103株在TSB中的生长曲线;结果，二者在培养10-14h时菌液中活菌数达到最大值，随后开始逐渐下降并趋于稳定。　　3.血清5型、13型HPs二价灭活苗研究　　3.1二价灭活苗制备　　将MC-203株和XJ-103株于TSB中复苏，划线接种于TSA上并连续传代三次后，挑取单菌落于TSB中，置于37℃、220r/min的空气摇床中培养12h左右，收集菌液。用0.2％的甲醛分别对两种菌液灭活20h，分别用PBS洗涤并浓缩为1.0×1010个/ml，将MC-203株菌液、XJ-103株菌液和佐剂（铝胶）按1∶1∶2的比例混合均匀，即成血清5型、13型HPs二价灭活苗。灭活苗为混悬液，置于2-8℃冰箱保存。　　3.2 HPs二价灭活苗检验　　3.2.1无菌检验　　吸取一定量的二价灭活苗放入无菌试管中，培养24h后，观察疫苗中有无细菌的生长;结果，疫苗的性状没有变化，无细菌生长。吸取少量的灭活苗均匀涂布于TSA上，培养24h后，观察培养基上有无细菌生长;结果，TSA上无细菌生长。表明，所制备的HPs二价灭活是无菌的。　　3.2.2安全性检验　　用已制备的灭活苗免疫14日龄哺乳仔猪和30-35日龄断奶仔猪各5头，每头猪注射2ml，同时设立未免对照组。通过观察其接种后的精神状态、呼吸和食欲等，评价所制的二价灭活苗的安全性。结果表明，接种后所有猪的精神状态良好，呼吸、食欲正常;表明，所制备的HPs二价灭活苗免疫仔猪是安全的。　　3.3 HPs二价灭活苗免疫效力研究　　3.3.1免疫抗体水平测定　　用制备的HPs二价灭活苗免疫14日龄哺乳仔猪测定其抗体水平，免疫5头，每头猪注射2ml，同时设立未免对照组。分别于首次免疫后第7、14、28、56、84、112、140、168、196天采血，用ELISA试剂盒检测HPs抗体。结果，免疫后第14天可检测到HPs阳性抗体;第84天HPs抗体水平达到峰值，第196天的血清中仍可以检测到HPs抗体。表明，所制备的HPs二价灭活苗免疫仔猪后能够产生较好的抗体水平。　　3.3.2免疫保护效力研究　　分别用制备的灭活苗、进口商品灭活苗和国产商品灭活苗免疫30-35日龄仔猪，研究HPs二价灭活苗的免疫保护效力。每种灭活苗免疫5头仔猪，首免3周后二免，同时设立未免对照组。二免后2周，分别用6.8×109CFU的MC-203株（血清5型）和8.1×109CFU的XJ-103株（血清13型）经腹腔攻毒;结果，制备的HPs灭活苗免疫总保护率为80％，进口的HPs灭活苗免疫总保护率为60％，国产的HPs灭活苗免疫总保护率为60％。表明，研究的HPs二价灭活苗具有很好的免疫保护效力，并且其免疫保护效力达到或优于实验对照商品灭活苗。