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目的:高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)被认为是一种迄今为止经体外培养而获取的最早期的造血干/祖细胞(HSPCs)之一。HPP-CFC检测有助于研究不同组织来源的HSPCs的特性。虽然已有研究证明人胎盘组织(PT)富含HSPCs,但其生物学特性所知不多。本研究旨在通过对人胎盘CD133+细胞群中HPP-CFC检测与生物学特性的分析,进一步阐明人胎盘HSPCs的性质,为人胎盘作为HSCs移植的供体资源提供新的实验依据。
方法:采用机械法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用Histopaque分离出单个核细胞(MNCs),经磁式分选MACS)分离纯化CD133+和CD133-细胞。将分选的CD133+和CD133-细胞分别接种于24孔含0.5m11%甲基纤维素培养基H4435培养板中,于5%CO2、37℃、饱和湿度培养4周,观察HPP-CFC集落形成能力。用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析。实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析。
结果:①培养4周后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份别扩增了265.50±121.37和362.00±178.36倍,两者比较无明显差异(P>0.05)。PT-CD133-与UCB-CD133-细胞组份虽有不同程度的扩增,分别为5.13±5.32和36.26±33.33倍,但远不及CD133+细胞组(P<0.01)。②PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为32.44±11.23/5×103、17.67±5.68/5×103,前者CD133+细胞中HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01)。③PT-CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28天时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少。
结论:①首次发现人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC。这为胎盘是胎儿期造血器官的观点和临床应用提供了新的实验证据。②HPP-CFC有助于研究HSPC的性质及其对造血生长因子的反应性。