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目的：研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, H.pylori）对NLRP3炎症小体信号通路的活化作用，并初步探讨H.pylori活化NLRP3炎症小体的机制，阐明NLRP3炎症小体是否参与了H.pylori诱导胃黏膜上皮细胞的炎症反应。 方法:将H.pylori国际标准株NCTC11639涂布在哥伦比亚血琼脂平板上，放入三气培养箱（85％N2，10％CO2，5％O2），37℃培养48～72 h，通过革兰氏染色、尿素酶试验及PCR扩增H.pylori16sRNA基因并测序鉴定后传代培养备用；按照H.pylori细菌数:细胞数（感染复数，MOI）为100:1、200:1的比例感染胃黏膜上皮细胞株GES-1，并于6 h和12 h收集细胞， RT-qPCR(Real-time PCR)检测 NLRP3、半胱氨酸蛋白酶caspase-1（cysteiny aspartate-specific protease-1，caspase-1）、凋亡相关斑点样衔接蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD， ASC）mRNA水平，Western blot检测NLRP3炎症小体中NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达水平；ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β的含量。用25 mM的ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）预处理 GES-1细胞30 min，再按照MOI为100:1、200:1加入H.pylori NCTC11639，与细胞共孵育6 h和12 h，检测NAC预处理对H.pylori诱导的 NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达以及 IL-1β分泌的影响；将H.pylori按照MOI为100:1、200:1的比例与胃癌细胞株MKN-45、AGS共孵育，分别于6 h和12 h收集细胞， RT-qPCR和Western blot分别检测NLRP3、ASC及caspase-1 mRNA和蛋白的表达水平。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β的含量。 结果：1. H.pylori国际标准株NCTC11639培养及鉴定结果：NCTC11639在哥伦比亚血平板上呈细小半透明不溶血菌落；经革兰氏染色后于显微镜观察，可见H.pylori为革兰氏阴性菌，菌体细小、弯曲呈S形；挑取菌落行快速尿素酶试验呈强阳性；提取菌株DNA并进行16sRNA的基因扩增，电泳可见在550 bp处有一条带，测序结果经序列比对确定为NCTC11639。2. H.pylori感染GES-1细胞后，与对照组比较，无论是感染6 h还是感染12 h， NLRP3、caspase-1及ASC mRNA和蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加，差异均具有统计学意义（P<0.05），但用NAC预处理GES-1细胞后， NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低，细胞培养上清液中IL-1β的浓度也降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）；H.pylori感染6 h和12 h之间，各检测指标差异无统计学意义。3. H.pylori感染肿瘤细胞株MKN-45、AGS细胞后，与对照组比较， NLRP3 mRNA和/或蛋白表达随着感染复数的增加而增加，但caspase-1和ASC mRNA和/或蛋白的表达随着感染复数的增加而降低，且MKN-45细胞不表达ASC蛋白，差异均具有统计学意义（P<0.05）；MKN-45细胞培养上清液中IL-1β的浓度也随着感染复数的增加而降低，差异有统计学意义（P<0.05）。H.pylori感染6 h和12 h之间，各检测指标差异无统计学意义。 结论：1. H.pylori在体外能活化GES-1细胞中NLRP3炎症小体，上调相关蛋白NLRP3、caspase-1和ASC的表达，促进IL-1β炎症因子的释放；2. ROS途径可能参与H.pylori对 GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活；3. H.pylori在体外能上调胃癌细胞中NLRP3蛋白的表达，但抑制其下游子caspase-1和ASC蛋白的表达，抑制IL-1β炎症因子的释放，提示胃肿瘤细胞可能存在某种炎症反应的抑制机制。