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研究背景和目的软组织缺损一直是整形外科面临的难题,传统的治疗方法存在诸多缺点,而应用生物材料也存在吸收、生物相容性低及排异反应等缺点。脂肪组织经过脱细胞处理后制备为脱细胞脂肪组织(Decellularization of adipose tissues,DAT),其仍能保留三维的细胞外基质结构,动物实验发现其能在体内诱导成脂,目前是脂肪组织工程重要的支架来源。猪脂肪来源广泛,易于获取,是研究DAT的重要材料来源。猪脂肪分为皮下脂肪(subcutaneous adipose tissue,SAT)和内脏脂肪(visceral adipose tissue,VAT),哪种脂肪是最佳的材料来源呢?有研究指出,猪SAT和VAT存在物理结构上的差异。我们在预实验中发现,SAT和VAT的刚度不同。有研究指出,细胞外基质的力学环境对细胞的生长分化起着重要作用,细胞外基质的刚度能显著影响细胞的行为,那么DAT在体内再生脂肪的过程中,其支架本身的刚度是否参与调控脂肪再生的过程?如果可以证明两种不同刚度的DAT支架可以诱导不同的成脂结果,那么支架的刚度又是通过什么方式影响脂肪再生的过程呢?基于上述科学问题,本研究以SAT和VAT这两种支架作为重要的实验模型,探究支架的刚度影响成脂的机制,旨在将来通过人为调节支架的刚度调控脂肪再生的过程,进一步用于研发可注射式的DAT填充物。方法与实验结果以猪皮下脂肪和内脏脂肪为脱细胞材料来源,用物理匀浆法预先处理脂肪组织,迅速破坏脂肪细胞膜,释放油滴后进行后续脱细胞处理,发现可以节省时间和试剂。支架的刚度检测结果显示,SAT的刚度高于VAT。将SAT和VAT支架分别放置于小鼠体内,移植后6周、12周取材。结果发现,移植后6周和12周,VAT移植物内新生脂肪细胞数量均多于SAT,Real-Time PCP检测结果显示,VAT移植物PPARy表达量明显高于SAT,提示两种不同刚度的DAT支架在体内诱导了不同的脂肪再生过程。进一步的体外试验用DAT支架与脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ASCs)共培养,种植后3天、14天取材。结果发现种植后3天,细胞骨架F肌动蛋白(F-Actin)染色显示SAT支架和VAT支架上的ASCs细胞骨架F-Actin均呈现束状排列;而种植后14天,两种支架上的ASCs细胞骨架F-Actin排布出现差别,VAT支架上的ASCs细胞骨架F-Actin排布相对更紧凑,近似圆形,提示脱细胞脂肪支架的刚性通过影响脂肪干细胞F-Actin的排列方式进而影响成脂结果。结论1.物理匀浆法是脂肪组织脱细胞过程中高效去除油脂的方法。2.内脏脂肪脱细胞基质的刚度低于皮下脂肪脱细胞基质。3.内脏脂肪脱细胞基质的成脂能力高于皮下脂肪脱细胞基质。4.脂肪脱细胞基质的刚性通过影响脂肪干细胞F-Actin的排列方式进而影响成脂结果。