【摘 要】
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本文对重组大肠杆菌BL21(DE3)可溶性表达羧肽酶原B(pCPB)的培养条件，酶解激活条件及纯化工艺进行了研究。 在摇瓶水平下，通过优化培养温度，诱导时间，诱导剂浓度，摇床的转速等条
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本文对重组大肠杆菌BL21(DE3)可溶性表达羧肽酶原B(pCPB)的培养条件，酶解激活条件及纯化工艺进行了研究。
在摇瓶水平下，通过优化培养温度，诱导时间，诱导剂浓度，摇床的转速等条件，促成了羧肽酶原B以可溶性形式表达；然后，对羧肽酶原B的酶解进行了摸索，主要从胰蛋白酶酶解作用的量和酶解时间等方面确定了最佳酶解条件，在此条件下酶解得到活性羧肽酶B；将活性羧肽酶B分别上DEAE-FF离子交换柱和Octyl-FF疏水柱进行纯化，得到羧肽酶B纯品。
温度是决定羧肽酶原B在表达过程中会否形成包涵体的重要因素之一。通过试验，确立了15℃为可溶性表达的最佳温度，在此温度下进一步确定了诱导剂IPTG浓度，诱导时间，Zn2+离子添加量等若干因素，从而所得到的促成可溶性pCPB表达的最佳条件，即：15℃，150rpm转速下，0.1mMIPTG诱导培养24h。
分别从酶解时间，胰蛋白酶加入量考察了胰蛋白酶酶解pCPB的条件，即：以1：150比例的胰蛋白酶酶切2.5h。
活性CPB通过上柱纯化，进一步提高纯度和比活，得到目的蛋白。
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