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目的: 疏经防痛胶囊是导师治疗痛经的经验方,由经方(四逆散)加味而成,具有养血益肝、行气助用、祛瘀止痛之功效,临床应用疗效显著。为了评价疏经防痛胶囊的安全性,阐明其疗效,进一步揭示疏经防痛胶囊治疗痛经的作用机制,本文根据其功能和主治,对疏经防痛胶囊进行了毒理学及主要药效学实验研究。同时,采用雌激素和缩宫素诱发大鼠原发性痛经模型,初步探讨其治疗痛经的作用机制,为临床应用及进一步将其开发成为治疗原发性痛经的新药提供理论基础和实验依据。 方法: 1毒理学实验 按最大浓度、最大给药容量0.4ml/10g体重,灌胃给药,1次/天,观察疏经防痛胶囊对小鼠的急性毒性作用。 2镇痛抗炎作用的实验 把符合各实验要求的大、小鼠随机分为六组,分别为空白对照组、疏经防痛胶囊高、中、低剂量组、以消炎痛作为西药阳性对照药,以田七痛经胶囊作为中药阳性对照药,给药途径均为灌胃给药。采用热板法和扭体法来观测疏经防痛胶囊的镇痛作用。采用对二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验和蛋清致大鼠足爪肿胀实验来观测疏经防痛胶囊的抗炎作用。 3疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠的影响 通过大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液增加子宫对缩宫素的敏感性,腹腔注射催产素造大鼠痛经模型。观察并记录给催产素后30min内大鼠扭体反应发生的次数。在给予催产素1h后,处死大鼠,取同侧同位段新鲜子宫,用放免法检测PGF2a、PGE2的含量。并在光镜下观察各组大鼠子宫组织病理形态学改变。 结果: 1急性毒性实验:疏经防痛胶囊给药后体重与空白对照组比较,P>O.05,无显著性差异。给药后观察期间,与空白组比较,各组小鼠未出现任何异常反应,无一只动物死亡,尸检肉眼观察内脏器官无异常变化。实验中测定小鼠1日内的最大给药量为50g/kg,相当于临床拟用人日常用量的110倍。表明在此剂量下灌胃对小鼠是安全的。 2镇痛实验:(1)热板法:与空白组相比,在观测的各时间段,各给药组均能提高小鼠的痛阈值。其中疏经防痛胶囊高剂量组、消炎痛组极显著提高给药后小鼠的痛阈值(P<0.001),疏经防痛胶囊中剂量组显著提高给药后小鼠的痛阈值(P<0.01),田七痛经胶囊、疏经防痛胶囊低剂量组均能提高给药后小鼠的痛阈值(P﹤0.O5或P﹤0.O1)。 (2)扭体法:与空白对照组相比,各给药组均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体反应的次数,均有显著性差异。其中疏经防痛胶囊高、中剂量组可显著减少小鼠扭体次数(P<0.001、P<0.01)。疏经防痛胶囊各剂量组的扭体抑制率均高于田七痛经胶囊组,且随着药量得增加,其扭体抑制率升高。 3抗炎作用实验:(1)小鼠耳廓肿胀法:与空白对照组相比,疏经防痛胶囊各剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用。其中高剂量、中剂量组显著抑制小鼠耳肿胀(P<0.001、P<0.01),疏经防痛胶囊各剂量肿胀抑制率均高于田七痛经胶囊组,并且肿胀抑制率随剂量增加而递增。(2)大鼠足跖肿胀法:与空白组比较,疏经防痛胶囊各剂量组对大鼠足跖肿胀均有显著的抑制作用(P﹤0.01或 P<0.05)。 4疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠的影响 (1)疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠扭体反应的影响 与模型组比较,田七组与疏经防痛胶囊组能明显降低大鼠30min内扭体次数,具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。其中,疏经防痛胶囊和田七痛经胶囊对痛经模型大鼠发生扭体的抑制率分别为67.21%,48.74%。 (2)疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠子宫内膜组织病理形态学的影响 给药组间的病理组织学改变无显著差别,与模型组相比,疏经防痛胶囊和田七组痛经胶囊组病变程度较为轻微。疏经防痛胶囊可使痛经模型大鼠子宫内膜组织水肿减轻,固有层厚度变薄,腺体分泌细胞增多,螺旋动脉数量减少。 (3)疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠子宫内膜组织PGF2a表达的影响 与空白组比较,模型组有显著增加PGF2a表达的面积总和、平均光密度、平均黑度均值、积分光密度总和(P<0.01)。与模型组相比,疏经防痛胶囊组和田七痛经胶囊组可降低PGF2a表达。疏经防痛胶囊组极显著降低了PGF2a的面积总和、平均光密度、平均黑度均值、积分光密度总和(P<0.01)。 (4)疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠子宫内膜组织PGF2a/PGE2比值表达的影响 与空白组比较,模型组有显著增加PGF2a/PGE2比值表达的面积总和、平均光密度、平均黑度均值、积分光密度总和(P<0.01)。与模型组比较,疏经防痛胶囊组和田七痛经胶囊组有显著降低PGF2a/PGE2比值表达的面积总和、平均光密度、平均黑度均值、积分光密度总和(P<0.01)。 (5)疏经防痛胶囊对痛经模型大鼠子宫内膜组织PGE2表达的影响 与空白组比较,模型组有显著增加PGE2表达的面积总和、平均光密度、平均黑度均值、积分光密度总和(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,疏经防痛胶囊组显著增加了PGE2表达的面积总和、平均光密度、平均黑度均值、积分光密度总和(P<0.01)。 结论: 1.毒理学实验表明小鼠1日内的最大给药量为50g/kg,相当于临床拟用人日常用量的110倍,无一只动物死亡,尸检肉眼观察内脏器官无异常变化。说明在此剂量下灌胃对小鼠是安全的。 2.疏经防痛胶囊具有显著的镇痛抗炎作用,并存在一定的量效关系。 3.疏经防痛胶囊明显减少痛经模型大鼠扭体次数,进一步说明其具有镇痛解痉作用。 4.疏经防痛胶囊可使痛经模型大鼠子宫内膜组织水肿减轻,固有层厚度变薄,腺体分泌细胞增多,螺旋动脉数量减少,改善了瘀阻状态,具有抗炎镇痛的功效。 5.疏经防痛胶囊能有效调节痛经模型大鼠子宫组织前列腺素的分泌。其作用机制可能是通过降低痛经模型大鼠子宫组织PGF2a含量表达,升高PGE2含量表达,降低PGF2a/PGE2比值含量表达,从而抑制子宫平滑肌收缩,降低子宫平滑肌紧张度,达到止痛目的。