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目的:支气管哮喘(bronchial astham)是世界医学界公认的四大顽症之一,被列为十大死亡原因之最。目前,随着人们生活环境的改变,发病率逐年上升。其临床表现为突然而反复发作的喘息,呼吸困难,胸闷和咳嗽。气道炎症与气道重塑是支气管哮喘发病的病理基础。本实验通过建立哮喘模型,观察哮喘大鼠吸入布地奈德后血清中LI-25与IL-12比值的变化,探讨哮喘时免疫失衡与NF-κB表达的动态关系。观察哮喘大鼠吸入布地奈德后气道NF-κB,MMP-9表达,探讨哮喘时气道重塑与NF-κB的关系。方法:1动物与药品Wistar雄性大鼠30只,由河北省实验动物中心提供(实验动物质量合格证编号:903010);布地奈德由阿斯利康制药公司生产;免疫组化试剂盒,一抗cox2兔抗IgG多克隆抗体、购于boshide公司,SP9001试剂盒及DAB显色剂购于北京中衫生物技术有限公司。酶联免疫试剂盒购于美国RB公司;其他实验药品由河北医科大学免疫教研室提供。2模型制备及实验分组用随机数字法将30只雄Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组、哮喘模型组、布地奈德治疗组,每组10只。哮喘大鼠模型的制备分致敏和激发两步。除正常对照组外,其余2组于第1天、第8天、第15天分3次腹腔注射抗原液1ml(含卵蛋白100mg、氢氧化铝干粉100mg)致敏,正常对照组用等量的生理盐水进行致敏;第21天开始将大鼠放入自制的不完全封闭的有机玻璃箱内,哮喘模型组和布地奈德治疗组予1%卵蛋白(OVA)溶液用空气压缩泵喷雾激发,每天1次,每次20分钟,连续激发7天,布地奈德治疗组于激发后,均采用布地奈德雾化吸入治疗,方法为0.5mg/ml布地奈德加入1ml生理盐水中,放入压缩雾化器中雾化吸入,bid。支气管哮喘组激发后以生理盐水雾化吸入,对照组雾化生理盐水作为对照。上述处理共持续7天。各组于末次诱发哮喘后24小时内麻醉,分离右侧股动脉,留取血标本,取血清-70℃保存,备做酶联免疫。右肺组织灌入4%多聚甲醛至右肺膨胀,然后结扎右支气管,固定,取右肺中叶组织,备做免疫组化。4指标的检测4.1 IL-12与IL-25的检测应用ELISA方法检测大鼠血清IL-12及IL-25的含量,其操作步骤以试剂说明书进行。4.2免疫组化法检测哮喘肺组织中NF-κB与MMP-9的表达采用SP9001通用二步法试剂盒检测肺组织中NF-κB与MMP-9的表达,光镜观察,阳性部位呈棕黄色。设定阳性比率,并行统计学处理。结果:1哮喘大鼠模型鉴定模型组大鼠在吸入OVA后不久即出现躁动不安,搔抓颜面皮毛等过敏症状,继而大鼠俯伏不动,出现呼吸急促,呼吸困难(明显的腹式呼吸),部分大鼠可闻及响亮的呼气相喘鸣音,口鼻流出粘液,严重者可出现呼吸不规则,反复激发后大鼠毛色失去光泽,精神不振和反应迟钝。2酶联免疫检测结果2.1血清IL-25水平的变化哮喘组血清IL-25含量是(40.71±3.87)pg/ml,激素治疗组血清IL-25含量是(30.43±1.48)pg/ml,对照组血清IL-25的含量是(25.96±1.74)pg/ml,三者比较有统计学意义(P<0.05)。并且哮喘组血清IL-25含量(40.71±3.87)pg/ml高于激素治疗组(30.43±1.48)pg/ml,两者比较有统计学差异,明显高于对照组(25.96±1.74)pg/ml,两者比较有统计学差异(P<0.05),激素治疗组与对照组之间没有显著性差异(P>0.05)。2.2血清IL-12水平的变化哮喘组血清IL-12含量是(25.91±3.20)pg/ml,激素治疗组血清IL-12含量是(29.42.±2.43)pg/ml,对照组血清IL-12的含量是(33.71±2.69)pg/ml,三者比较有统计学意义(P<0.05)。并且哮喘组血清IL-12含量(25.91±3.20)pg/ml较激素治疗组降低,两者比较有统计学差异(P<0.05),较对照组明显降低,有统计学差异(P<0.05),激素治疗组与对照组之间有统计学意义(P<0.05)。3各组大鼠组织标本的制备2.3血清IL-25/ IL-12比值变化模型组血清中IL-25/ IL-12比值与正常组相比明显升高,差异有显著性(P<0.01);经激素治疗后,血清中IL-25/ IL-12比值与模型组相比降低,与正常组相比升高,差异亦均有显著性(P<0.01)。3切片结果的鉴定3.1光镜结果哮喘大鼠细支气管痉挛、收缩呈菊花状,管腔内有分泌物,细支气管、小血管周围见明显炎性细胞浸润,以嗜酸细胞、淋巴细胞为主,亦见中性粒细胞;肺泡间隔增宽,有纤维化,大量淋巴细胞、巨噬细胞浸润。治疗组大鼠细支气管无明显痉挛、收缩,管腔内无分泌物,管壁周围炎性细胞浸润明显减少,肺泡壁间隔无增宽。3.2免疫组化检测结果NF-κB和MMP-9在模型组、激素治疗组和正常对照组大鼠肺组织中均有阳性表达,并主要在细胞核表达,少量在细胞浆表达。3.2.1肺组织内NF-κB表达的变化模型组肺组织内NF-κB的表达与正常组相比明显升高,差异有显著性(P<0.01);经激素治疗后,大鼠肺组织内NF-κB的表达与模型组相比降低,与正常组相比升高,差异均有显著性(P<0.01)。3.2.2肺组织内MMP-9表达的变化模型组肺组织内MMP-9的表达与正常组相比明显升高,差异有显著性(P<0.01);经激素治疗后,大鼠肺组织内MMP-9的表达与模型组相比降低,与正常组相比升高,差异均有显著性(P<0.01)。4各指标之间的相关性应用Spearman等级相关法分析发现:IL-25与IL-12之间存在负相关(r=-0.754, P<0.01),IL-25与NF-κB之间存在正相关(r=0.812, P<0.01),IL-12与NF-κB之间存在负相关(r=-0.747, P<0.01),MMp-9与与NF-κB之间存在正相关(r=0.797, P<0.01)。结论:1哮喘时,Th1/Th2免疫平衡破坏,T细胞向Th2方向偏移,Th2优势反应在哮喘发病机制中有重要意义。2哮喘组大鼠NF-κB支气管肺组织中表达明显高于对照组,说明哮喘气道炎症及重塑过程中NF-κB具有重要作用。3哮喘组大鼠NF-κB活性增强,IL-25水平上升,IL-12水平下降,IL-25/IL-12升高,相关分析示:NF-κB与Th2类细胞因子IL-25成正相关,与Th1类细胞因子IL-12成负相关。4哮喘组大鼠NF-κB活化与MMP-9支气管肺组织中表达明显高于对照组,支气管黏膜增生肥厚明显,表明两者参与气道重塑的过程,相关分析示两者存在正相关。5布地奈德作为治疗哮喘的有效药物,可以抑制NF-κB活性,使IL-25水平降低,IL-12水平升高,改善减轻气道炎症。使MMP-9水平降低,改善气道重塑。可作为治疗哮喘的首选。为临床治疗哮喘提供理论依据。