杉木转录因子ClMYB44的功能研究

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MYB(v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog,简称 MYB)家族是一类转录因子,具有高度保守的DNA结合结构域,在植物生长、发育以及非生物胁迫应答中具有重要的生物学功能。除此之外,也是调控木质素生物合成的重要影响因子,普遍参与植物代谢调控网络中。磷是植物生长、发育所必须的大量元素也是植物面临的最重要的非生物胁迫之一,磷的缺乏将会导致植物矮小、叶片黄花等性状。同时磷也是木质素生物合成的重要影响因素。杉木(Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook)是我国重要的用材树种,也是我国人工林的重要组成部分,因其材质优良,使其具有广泛的用途。但是杉木ClMYB444转录因子目前还没有克隆,以及在杉木中的生物学功能目前仍不清楚,因此,本文利用杉木转录组数据,克隆了杉木ClMYB44基因,进行了以下研究内容:1.通过转录组测序的方法获得了转录因子ClMYB44的基因序列,采用Primer5.0设计带有酶切位点的特异性引物,克隆杉木转录因子ClMYB44基因。结果表明其CDS全长为1239bp,编码413个氨基酸,对ClMYB44进行了生物信息学分析,发现其二级结构主要由α-螺旋和不规则卷曲构成。2.用不同浓度的磷处理一年生的杉木,处理时间分别为15d,30d,45d,60d。通过qRT-PCR检测发现ClMYB44基因在8mg/L磷处理后的杉木中表达量最高,磷浓度过高或过低可能会抑制杉木的ClMYB44基因的表达。3.采用酶切连接的方法构建了pGBKT7-ClMYB44酵母表达载体,将pGBKT7-ClMYB44导入活化的酵母菌株AH109中,进行酵母单杂交实验证实了ClMYB44具有转录活性,确定了我们克隆的ClMYB44是一个转录因子。4.采用酶切连接的方法构建了pBI121-ClMYB44载体,通过农杆菌介导的方法浸染杨树,获得了转基因杨树ClMYB44的愈伤组织。本研究结果为在磷处理下进一步研究ClMYB44的功能奠定基础,为杉木的分子育种和定向品种改良提供技术支持。
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