论文部分内容阅读
三黄片来源于医圣张仲景经典名方“三黄泻心汤”,由大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱组成,收载于历版《中国药典》,具有抗炎、抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多重药理活性以及泻火通便、清热解毒等多种功效,临床广泛应用于治疗咽喉肿痛、尿黄便秘、牙龈肿痛等症。针对目前采用单一或少数几个指标成分不足以表征中药尤其复方制剂整体质量,以及体外化学属性表达无法真实反映体内有效组分群特征规律的实际问题,本文选取三黄片为研究对象,以中药整体观为指导思想,采用多种分析技术手段对该复方制剂质量控制方法进行研究。研究思路主要为:首先运用多种分析方法,多角度整合的模式建立定性定量指纹图谱,对质量评价方法进行研究,其次将构建的指纹图谱和化学计量学进行有机结合探讨其谱效关系,最后把体外化学成分的鉴定和入血成分的初步研究相联系,为其药效物质、药代动力学等方面的研究提供科学依据。1、三黄片254 nm HPLC数字化指纹图谱的研究在阐明线性定量指纹法原理的基础上,建立30批三黄片样品254 nm下的超信息数字化指纹图谱,以能表征指纹图谱特征的46个参数挖掘样品潜在的化学信息并直观反映其固有特征,运用线性定量指纹法以定性相似度SL、定量相似度ML和指纹均化性a三个参数为指标综合评价样品质量,揭示其所含化学指纹数量和含量的相似性和(或)差异性并对指纹峰来源进行了归属研究,为后续研究奠定了基础。2、三黄片多波长指纹图谱和清除DPPH自由基谱效关系研究采用HPLC-DAD建立四波长指纹图谱,运用线性定量指纹法评价30批样品各波长下的质量,均方开方法成功运用于整合多波长指纹信息,对三黄片所含的八个主要成分(芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷和汉黄苓苷)在其最大吸收波长处测定含量,使用多波长指纹图谱联合八指标成分同时定量分析以实现同一厂家不同批次和(或)不同生产厂家的样品质量一致性评价。同时,对三黄片清除DPPH自由基的能力也进行了测定,建立的指纹成分与抗氧化活性之间的谱效关系(偏最小二乘回归模型)不仅对现有样品和未知新样品都具有较强地预测其活性的能力,而且为与生物活性有密切相关关系的质控指标成分的定量研究提供了重要的参考线索。3、三黄片HPCE指纹图谱和清除羟基自由基活性研究首次采用梯形法优化背景电解质,在此基础上建立毛细管电泳指纹图谱,毛细管电泳指纹图谱联合两组分(盐酸小檗碱和黄芩苷)定量测定共同评价不同来源的30批样品质量一致性并运用线性定量指纹法从定性定量两个角度区分样品质量。同时对三黄片清除羟基自由基的能力也进行了测定,建立的偏最小二乘模型拟合程度较好不仅可以根据样品指纹图谱预测其抗氧化能力并且初步探讨了该制剂指纹图谱与抗氧化活性之间的关系,实验结果表明化学属性与活性检测相结合的方法,为中药材及其制剂的质量评价和控制提供了一种更为可靠有效的参考方法。4、UV与IR光谱指纹图谱及燃烧热整合评价三黄片质量建立紫外指纹图谱、红外指纹图谱并测定其燃烧热值,将三种分析方法结果取均值整合后评价样品质量,运用多种分析技术共同监测样品中饱和、不饱和键的化学成分信息,试图揭示各类化学组分的整体含量特征,从多角度展现中药质量概貌,为中药在其复杂组分未完全分离的情况下,提供了一种简捷快速全面客观的定性定量质控技术方法研究手段。5、三黄片体外化学成分鉴定和入血成分初步研究首先采用UPLC-Q-TOF和UPLC-MS/MS两种液质联用技术对化学成分进行研究,共鉴定出28个化合物,其中8个化合物(芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷和汉黄芩苷)经与对照品比对后确认,其余化合物则通过精确分子量和质谱碎片等信息推测其结构,再采用UPLC-MS/MS相同的分析条件对灌胃给予大鼠三黄片提取液后血浆中入血成分进行初探,结果为芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、盐酸小檗碱、黄芩苷和汉黄芩苷均以原型形式入血并对其进行了半定量分析,为后续药效物质和药代动力学等研究提供参考依据。