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目的结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）仍是人类最常见的恶性肿瘤之一，据估计2008年全球新发病例120万，而同年死亡60.8万，仍是人类健康的重大威胁[1]；四分之一的结直肠癌新病例为IV期转移性结直肠癌，接受根治性治疗的早期患者，有三分之一的病例会出现疾病转移复发而成为晚期，即在所有结直肠癌中大约有一半的病人最终属于晚期转移性结直肠癌（Metastatic ColorectalCancer mCRC）[2]。治疗手段主要以手术放化疗及靶向治疗为主但疗效不佳，研发高效低毒的新药成为当前研究的热门。蟾蜍毒素(bufalin)是中药蟾酥的毒性配基之一，国内外的研究证实蟾蜍毒素可抑制白血病细胞和胃癌、卵巢癌及肺癌等实体瘤细胞增殖和或诱导凋亡[3-6]。但关于蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞凋亡与livin、Bcl-2、Bax及Caspase-3相关的基础研究尚未见报道。应用不同浓度蟾蜍毒素作用结肠腺癌细胞HT-29，探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其凋亡过程中livin、Bax、Bcl-2以及Caspase-3蛋白的变化，为进一步开展相关研究提供理论基础。方法（1） MTT检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制；（2）瑞氏-吉姆萨染色观察蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡形态学变化；（3）流式细胞术分析蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡；（4） Western-bolt检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达；（5）统计学方法所有数据均为3次独立实验结果，以x±s表示，应用SPSS16.0软件进行t检验和单因素方差分析，P<0.05差异存在统计学意义。结果(1)蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖，呈时间、剂量依赖关系，24h、48h、72h的IC50分别为90.29nmol/L、50.1nmol/L及19.9nmol/L。(2)蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡，形态学观察到典型的凋亡小体。(3)流式细胞仪检测到明显sub-G1（亚二倍体凋亡），sub-G1百分比由对照组的（0.54±0.31）%增至（3.68±1.63）%、（18.31±1.82）%及（22.41±3.81）%与对照组比较P<0.05差异有统计学意义。(4) Western-bolt检测Bcl-2表达分别下调至对照组的（88.51±7.71）%、(62.53±6.51)%、（45.70±5.18）%。Bax蛋白表达分别上调至对照组的1.50倍、1.74倍、2.05倍。各组数据与对照组比较差异有显著统计学意义（P<0.01）。livin蛋白表达水平下调到对照组的（81.31±1.12）%、（52.42±3.28）%和（29.10±5.62）%各组数据与对照组比较有显著统计学意义（P<0.01）。20nmol/L蟾蜍毒素作用结肠癌细胞株HT-29未能检测到活化Caspase-3蛋白表达，而40nmol/L及80nmol/L组可检测到17KD的活性亚基。结论1、蟾蜍毒素可抑制结肠腺癌细胞HT-29增殖，呈时间剂量依赖关系。2、蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞HT-29凋亡。3、蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞HT-29细胞凋亡过程中可明显上调Bcl-2/Bax比值、下调livin蛋白表达及增强Caspase-3蛋白活化。4、上调Bcl-2/Bax比值、下调livin蛋白表达并增强Caspase-3蛋白活化，可能为蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞HT-29细胞凋亡的途径。