扬子鳄基因组BAC文库及MHCⅡ类基因和QR基因物理图谱的构建

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:doraemon1226
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
扬子鳄(Alligator sinensis)是我国特有的珍稀濒危野生动物,长期以来,由于环境恶化、栖息地丧失以及人类活动的影响,其野外种群的数量急剧下降,目前只有在安徽、浙江两省交界区域有所分布,种群数量已不足120条。为保护这一珍稀濒危物种的,我国政府已经采取了一系列措施。1972年将扬子鳄列为Ⅰ级重点保护野生动物,1978年、1982年和1979年相继建立了安徽宣州扬子鳄繁殖研究中心、扬子鳄自然保护区、浙江长兴扬子鳄自然繁育研究中心等机构。   为了保护扬子鳄的基因资源,本文以长兴扬子鳄自然繁育研究中心提供的血液样品为材料,以细菌人工染色体(BAC)为载体,成功建立了高质量的扬子鳄基因组BAC文库。以该文库为实验材料,构建了扬子鳄主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类基因和嗅觉受体(OR)基因的克隆重叠群,既验证了该文库的有效性,又对文库进行了基础研究的应用。其主要研究结果如下:   1.以新鲜外周血为材料,利用pCC1BAC载体,成功构建了扬子鳄的基因组细菌人工染色体(BAC)文库。文库包含的216238个BAC克隆,保存于2254块96孔培养板上。经对随机挑取的150个BAC克隆进行电泳检测,计算出文库的平均插入片段为90kb,覆盖扬子鳄基因组约6.8倍(除去5.33%的空载体)。同时,从文库中获得任一单拷贝或多拷贝扬子鳄基因的概率为99.93%;   2.运用4D-PCR文库筛选技术,建立了扬子鳄基因组BAC文库的高效PCR筛选文库。该文库包括46个超级库和1564(46×34)个1D、2D、3D、4D超级亚库。任一引物或探针只需80个PCR反应,即可从BAC文库中筛选到所需的阳性BAC克隆;   3.用7对扬子鳄特异性PCR引物进行文库筛选,平均每对能够在文库中成功扩增到6.1个阳性克隆,表明了所建文库具有较高的覆盖率,并与文库覆盖率计算结果(6.8)基本达成一致。   4.基于MHCⅡ类以及OR基因的同源序列,成功设计了三对通用引物,并从扬子鳄基因组BAC文库中筛选到阳性BAC克隆的。   5.以这三对引物为基点,运用BAC质粒的末端测序和染色体步移,进行了一系列BAC文库阳性克隆的筛选,成功构建了两个克隆重叠群(contig)。   6.对OR基因克隆重叠群的9个BAC克隆进行测序,对所得数据进行分析,结果证明以上OR基因克隆重叠群的真实有效性,并对扬子鳄的OR基因进行了初步分析。
其他文献
湘西青平镇生态实验林场的森林植被是在中亚热带生物气候背景上,在石灰岩特殊环境影响F所形成的地带性植被。湖南湘西地处云贵高原东部平原的过渡区域,该区内喀斯特地貌发育
  Physicochemical characterization of bio-oil is unstable during the storage.Therefore it is necessary to find a stabilization strategy to retard the aging ra
会议
会议
花青素具有抗氧化、改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、消肿化淤和抑制静脉曲张等功能。由花青素生成的花色苷具有多种生态功能,包括光保护作用、提高植物耐寒抗冻能力、
以三倍体枇杷为材料,研究了不同消毒方式、MS培养基浓度、植物生长调节剂及浓度配比对茎尖培养及诱导生根的影响。结果表明,初代培养时,选择生长饱满、健壮的顶芽及适宜的消
  In this study,catalytic pyrolysis using HZSM-5 catalyst was explored for the production of olefins and aromatic hydrocarbons and nutrient-rich bio-char from
会议
准确可靠的过程测量数据是化工企业掌握运行状态和优化生产流程的基础。但是在实际生产中,测量数据受到测量设备和测量环境等因素的干扰,无法满足物料平衡等条件,甚至无法反映系统运行的真实状态,这为企业实现信息化留下了障碍。而数据校正技术是利用一系列算法和检验统计值对数据进行分析,检测并剔除数据中的显著误差,整体降低随机误差对数据的影响,补充未测数据,提高数据的准确度从而保证数据的有效性。本文以国内某企业烯
学位
  The increase in energy demand worldwide and diminishing fossil fuel reserves have driven the development of sustainable energy from renewable sources.Renewa
会议
  Bio-oil,produced from the fast pyrolysis of biomass,contains a wide variety of functional groups and molecular weights including acids,aldehydes,ketones,sug
会议
  In the present study,we reported the assembly of functional cellulolytic enzymes using a synthetic,cell-surface engineered yeast consortium.Trichoderma rees
会议