基于~1H-NMR的代谢组学方法对四种口腔念珠菌菌种鉴定及代谢产物初步分析

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目的:分别对白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和光滑念珠菌的标准菌菌株进行培养,通过检测四种念珠菌的不同时段的代谢产物,绘制不同念珠菌的特征性代谢核磁共振谱图,作为四种念珠菌的标准谱图,为将来念珠菌的核磁共振检测提供依据;利用主成分分析(PCA)法分析各自的代谢产物,探讨基于核磁共振的代谢组学方法在快速鉴别不同口腔念珠菌的种类方面的可能性;分析不同念珠菌的代谢产物,对其化学物质进行分类,探讨不同代谢产物对口腔念珠菌病的影响。方法:1.分别在沙保培养基中接种白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌的标准菌株进行增菌处理,然后以一定的时间间隔,测量0D600的吸光度值,采取比浊法计数,绘制生长曲线。2.选取四种念珠菌在生长最快期的菌液制作核磁共振检测样品,送入核磁共振仪进行检测并绘制四种念珠菌各自的核磁共振谱图。3.利用主成分分析法对四种念珠菌的代谢产物进行数据分析,然后分类归纳处理,分析不同念珠菌代谢产物在主成份得分图中的各自聚集性。4.对照各种数据库和参考文献,查阅相关的代谢产物信息,确定代谢产物的种类,并分析这些代谢产物对念珠菌病的影响。结果:四种念珠菌的生长曲线具有类似性,36h-48h为其生长代谢活跃期段;它们的核磁共振谱图具有明显的差异性;细胞外代谢产物具有各自的类聚关系,主成分分析法可以区分这四种念珠菌;四种念珠菌的代谢组化学物质种类不同,根据相关的文献报道,推断这些代谢产物与与念珠菌病的发病有关。结论:基于1H-NMR的代谢组学方法可以用来快速区分鉴别口腔常见致病性念珠菌。在对四种不同念珠菌的代谢产物进行分析后发现,白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和热带念珠菌有着共同的代谢产物,也有其各自特征性的代谢产物种类。部分代谢产物与念珠菌的生物被膜形成有关,针对这个现象可以考虑开发针对这些物质的靶点药物,从而抑制念珠菌病的发生。
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