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目的:研究脂联素(adiponectin,ADPN)对小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中T-型钙通道电流的作用和机制。
方法:应用WesternBolt及免疫荧光方法检测小鼠背根神经节上ADPN受体亚型的表达和分布情况。应用电生理和分子生物学的方法,研究ADPN对小鼠小直径DRG神经元T-型钙通道亚型电流及兴奋性的作用。同时,通过药理学方法研究其信号通路和作用机制。
结果:1)结果显示小鼠背根神经节上同时表达AdipoR1和AdipoR2;免疫荧光结果显示,AdipoR1主要在小直径DRG神经元上表达,并与Cav3.2共标记。2)电生理研究结果表明,在急性分离的DRG神经元上中,AdipoR1介导了ADPN对T-型钙通道电流的增大作用,并且呈现剂量依赖性。100nM脂联素对T-型钙电流的增大作用约为31.74±5.62%。在瞬时转染的HEK293细胞中,100nM脂联素对Cav3.2电流的增加率约为25.83±5.24%,而对Cav3.1和Cav3.3电流没有显著影响。3)药理学研究结果表明,ADPN通过PLC/IP3/CaMKⅡ途径增大T-型钙通道电流。4)ADPN可明显增强背根神经元的放电频率,此作用可被CaMKⅡ特异性阻断剂KN-93及AdipoR1的siRNA所翻转。5)行为学结果显示ADPN通过激活T-型钙通道诱导了小鼠机械痛、热痛和炎症痛觉过敏。
结论:在小鼠小直径DRG神经元中AdipoR1及其下游PLC/IP3/CaMKⅡ通路介导了ADPN对小鼠小直径DRG神经元T-型钙通道电流的增大作用,同时增强了神经元兴奋性,从而参与到了痛觉调制过程。
方法:应用WesternBolt及免疫荧光方法检测小鼠背根神经节上ADPN受体亚型的表达和分布情况。应用电生理和分子生物学的方法,研究ADPN对小鼠小直径DRG神经元T-型钙通道亚型电流及兴奋性的作用。同时,通过药理学方法研究其信号通路和作用机制。
结果:1)结果显示小鼠背根神经节上同时表达AdipoR1和AdipoR2;免疫荧光结果显示,AdipoR1主要在小直径DRG神经元上表达,并与Cav3.2共标记。2)电生理研究结果表明,在急性分离的DRG神经元上中,AdipoR1介导了ADPN对T-型钙通道电流的增大作用,并且呈现剂量依赖性。100nM脂联素对T-型钙电流的增大作用约为31.74±5.62%。在瞬时转染的HEK293细胞中,100nM脂联素对Cav3.2电流的增加率约为25.83±5.24%,而对Cav3.1和Cav3.3电流没有显著影响。3)药理学研究结果表明,ADPN通过PLC/IP3/CaMKⅡ途径增大T-型钙通道电流。4)ADPN可明显增强背根神经元的放电频率,此作用可被CaMKⅡ特异性阻断剂KN-93及AdipoR1的siRNA所翻转。5)行为学结果显示ADPN通过激活T-型钙通道诱导了小鼠机械痛、热痛和炎症痛觉过敏。
结论:在小鼠小直径DRG神经元中AdipoR1及其下游PLC/IP3/CaMKⅡ通路介导了ADPN对小鼠小直径DRG神经元T-型钙通道电流的增大作用,同时增强了神经元兴奋性,从而参与到了痛觉调制过程。