【摘 要】
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目的:本实验旨在探究miR-564在促进SMSCs向软骨细胞增殖与分化过程中的作用机制。方法:取第三代的SMSCs作为实验细胞,实验设计为如下三组:SMSCs空白对照组（空白组）;miRNA抑制剂转染SMSCs对照组（对照组）;miR-564抑制剂转染SMSCs实验组（实验组）。分别通过RT-PCR检测三组细胞miR-564的表达情况,证实转染效果成功后同时将三组滑膜间充质干细胞成软骨诱导培养3周
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目的:本实验旨在探究miR-564在促进SMSCs向软骨细胞增殖与分化过程中的作用机制。方法:取第三代的SMSCs作为实验细胞,实验设计为如下三组:SMSCs空白对照组（空白组）;miRNA抑制剂转染SMSCs对照组（对照组）;miR-564抑制剂转染SMSCs实验组（实验组）。分别通过RT-PCR检测三组细胞miR-564的表达情况,证实转染效果成功后同时将三组滑膜间充质干细胞成软骨诱导培养3周;首先检测诱导前7天内的三组滑膜间充质干细胞的增殖曲线,然后通过甲苯胺蓝染色观察诱导后软骨细胞的形态;接着通过RT-PCR分别检测三组实验软骨细胞分化相关基因（COL2A1、Aggrecan、SOX9）与TGF-BMP通路相关基因（TGFβ1、Smad4）的表达情况,并通过Western Blotting检测软骨细胞相关蛋白（COL2A1、Aggrecan、SOX9）及 TGF-BMP 通路相关蛋白（TGF β1、Smad4）的表达情况;最后敲除miR-564的靶基因TGF-β1的表达,通过RT-PCR检测SMSCs成软骨分化基因的表达情况。本次实验所有数据均采用单因素方差分析（one-way ANOVA）检验或者独立样本t检验。结果:1.成软骨诱导培养三周后,甲苯胺蓝染色观察细胞形态与特点基本符合软骨细胞,且实验组细胞数量更多,蓝染更明显;2.细胞增殖曲线表明实验组细胞增殖速度明显快于空白组和对照组（F=0.842,P<0.01）;3.RT-PCR检测与Western Blotting检测表明实验组软骨细胞分化相关基因与蛋白与空白组、对照组两组相比均明显升高（F=2274.75;F=447.31;F=30476.22;P<0.01）,并且实验组TGF-BMP关键基因及蛋白有所升高（F=457.02;F=291.19;P<0.01）。4.敲除靶基因TGF-β1后,与miR-564下调组相比软骨分化基因均有所下调（t=6.08,t=18.64,t=97.24;P<0.01）。结论:下调miR-564基因的表达可促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞增殖与分化,并且是通过作用于靶基因TGF-β 1引起TGF-BMP通路的级联反应实现的。
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