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目的研究乳腺癌干细胞抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合培养后对于体内外MCF-7/ADR肿瘤细胞的杀伤效果。方法1.培养MCF-7/ADR细胞,采用磁珠分选法分选CD44+CD24-乳腺癌干细胞。2.用上述分选的CD44+CD24-乳腺癌干细胞注入nod-scid小鼠(n=30)脂肪垫下,建立乳腺癌荷瘤鼠模型。3.由正常人外周血提取的单个核细胞分别诱导培养DC细胞和CIK细胞,用透射电子显微镜鉴定DC超微形态,流式细胞术鉴定CD3+CD56+CIK细胞比例。4.用乳腺癌细胞系MCF-7/ADR分别提取细胞冻融抗原和干细胞冻融抗原,并冲击诱导成功的DC。5.建立实验组：乳腺癌干细胞抗原冲击的DC联合CIK细胞组(BCSC-AP-DC+CIK组)；实验对照组：肿瘤抗原冲击的DC联合C1K细胞组(AP-DC+CIK组)；对照组1：未经抗原冲击DC-CIK细胞组(DC+CIK组)；对照组2：单纯CIK细胞组(CIK组)及空白对照组：生理盐水组(NS组)。6.用MTT法检测上述各组在体外对MCF-7/ADR细胞的杀伤情况。7.将各组细胞注入相应各组乳腺癌荷瘤鼠体内,观察各组小鼠肿瘤组织生长情况,比较各组小鼠在治疗前后肿瘤体积差异,并对治疗后5组小鼠肿瘤体积进行比较。8.用TUNEL法测定各组小鼠治疗后肿瘤组织的凋亡情况,计算各组小鼠肿瘤组织的凋亡指数。9.用免疫组织化学法测定各组小鼠在治疗后肿瘤组织中bax及bcl-2表达情况,检测其在体内对乳腺癌组织的抑瘤效果。结果1.经磁珠分选法可成功分离出CD44+CD24-乳腺癌干细胞。2.用CD44+CD24-乳腺癌细胞可成功建立乳腺癌荷瘤鼠模型。3.外周血单个核细胞可诱导为DC和CIK细胞。诱导后的DC细胞具有典型的DC细胞形态及细胞器；与经抗原活化后的DC共培养的CIK细胞CD3+CD56+细胞比例比与未经抗原活化的DC共培养的CIK及单独CIK阳性比例高,其差异有统计学意义(P<0.05)。4.在DC、CIK对MCF-7/ADR细胞的杀伤实验中：体外实验,5组间杀伤率差别有统计学意义(F＝28.15,P<0.05),进一步两两比较,发现BCSC-AP-DC+CIK组和AP-DC+CIK组两组间无统计学差异(P>0.05),其它各组间两两比较有统计学差异(P<0.05),BCSC-AP-DC+CIK组杀伤率最高,NS组杀伤率最低。5.体内实验中,实验组和对照组小鼠肿瘤体积在治疗后存在差异,同组小鼠肿瘤体积在治疗前后也存在差异(P<0.05),各组小鼠体积比较：BCSC-AP-DC+CIK<AP-DC+CIK组<DC+CIK组<CIK组<NS组。6.TUNEL染色阳性指数比较：BCSC-AP-DC+CIK> AP-DC+CIK组>DC+CIK组>CIK组>NS组。7.免疫组化染色结果：各组bax免疫组化结果IOD值比较：BCSC-AP-DC+CIK> AP-DC+CIK组>DC+CIK组>C1K组>NS组；各组bcl-2免疫组化结果IOD值比较：BCSC-AP-DC+CIK<AP-DC+CIK组<DC+CIK组<CIK组<NS组。结论1.外周血单个核细胞能够诱导培养出DC和CIK细胞,且与经抗原冲击的DC共培养的CIK细胞CD3+CD56+比例更高。2.在体外实验中,与经抗原冲击的DC细胞联合培养的CIK细胞的杀伤能力强于未经抗原冲击的CIK细胞及单独CIK组,但乳腺癌干细胞抗原冲击后的DC细胞联合CIK细胞的杀伤能力不优于经肿瘤抗原冲击后的DC细胞联合培养的CIK细胞。体内实验中：经乳腺癌干细胞抗原冲击的DC与CIK细胞作用后诱导同种乳腺癌细胞凋亡强于经普通乳腺癌细胞抗原冲击的DC联合CIK细胞、未经抗原冲击的DC联合CIK细胞及单独CIK的抗肿瘤效果,其发生机制与bcl-2蛋白超家族蛋白表达有关。