梨火疫病菌(Erwinia amylovora)能够引起仁果类果树及一些蔷薇科植物的火疫病害,造成严重的经济损失,是一类具有毁灭性危害的细菌性病害。目前,人们已经对梨火疫病菌的致病机理进行了广泛的研究,为进一步有效防治火疫病打下了坚实的基础。细菌是社会生态系统内的微生物,可以与相邻细菌彼此联系。细菌根据特定信号分子的浓度可以监测周围环境中自身或其它细菌的数量变化,当信号达到一定的浓度闽值时,能启动菌体中相关基因的表达来适应环境中的变化,这一调控系统被称为细菌的群体感应系统(Quorum sensing)。群体感应是一个复杂的依靠细胞密度控制毒力,胞外酶合成,运动,营养摄入,及生物膜形成的调控系统。Qs代表了革兰氏阴性菌调节基因的主要模式表达。LuxR家族转录因子是一类分布广泛和功能多样的调控因子,属于四环素蛋白家族。它可以激活和抑制许多基因的表达,包括调控相邻基因和自我调控,从而涉及许多重要的生理活动,如致病因子的产生,生物膜的形成,群体感应(QS),乙酸代谢,运动,发光,生态竞争等。我们总结了LuxR家族转录调控因子的相关机制和多样性的功能,它们结合特异性DNA蛋白序列,通过增强或衰减,以确保靶基因的准确表达。luxR型转录调节因子是广泛分布于革兰氏阴性细菌的四环素蛋白家族转录因子成员,含有一个螺旋的HTH C-末端的DNA结合域。本研究首次鉴定并克隆出了梨火疫病菌的未配对的luxR同源基因EaluxR。利用插入突变的方法,获得luxR的突变体EaΔluxR及其互补子EaΔlwxR(pBBRRH),进而初步研究了该基因对一些生物学特性的影响。研究结果表明,与野生型病菌的强致病力相比,luxR转录调控因子的突变株对于梨叶及梨幼果的的致病性明显减弱,在NA液体培养基上的生长速度明显减慢,对耐过氧化氢及胞外多糖产生能力明显减弱,但是,对烟草过敏性反应,抗生素耐性,生物膜形成没有任何影响。群体感应(Quorum sensing, QS)就是细菌根据细胞密度的变化而进行基因表达调控的生理行为。革兰氏阴性菌的群体感应系统主要受LuxI-LuxR型蛋白的调控。其中,LuxR蛋白在作为信号分子的受体蛋白的同时,还能激活一系列相关基因的表达。本研究在本实验室已有的研究工作的基础上,采用PCR法扩增了EaexpR基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET28a22801。该重组质粒转化大肠杆菌Rosepta(DE3)pLysS感受态细胞并经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出子量约28kDa的融合蛋白。该蛋白以包涵体和可溶体形式存在。