【摘 要】
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目的:制备并鉴定紫杉醇氧化铁纳米粒子（IONP@PTX）,并探讨其对胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）的抑制作用及潜在机制。方法:高温热解法及相转移法合成IONP@PTX,使用高效液相色谱仪及紫外分光光度计检测紫杉醇负载情况及其累积释放率,通过粒径分析、Zeta电位和透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）对IONP@PTX进行表征。
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目的:制备并鉴定紫杉醇氧化铁纳米粒子（IONP@PTX）,并探讨其对胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）的抑制作用及潜在机制。方法:高温热解法及相转移法合成IONP@PTX,使用高效液相色谱仪及紫外分光光度计检测紫杉醇负载情况及其累积释放率,通过粒径分析、Zeta电位和透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）对IONP@PTX进行表征。通过CCK8试剂盒检测IONP@PTX或PTX作用于U251细胞或HMC3细胞后的细胞活力。将PTX、IONP@PTX、IONP@PTX联合3-MA或IONP@PTX联合雷帕霉素作用于U251细胞,通过CCK8试剂盒检测细胞活力;通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用2’-7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）或C11-BODIPY染色检测细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）和脂质过氧化水平;通过铁离子检测试剂盒检测细胞内的铁离子浓度;通过western blot实验检测自噬及铁死亡生物标志物的表达。U251细胞皮下注射于裸鼠右前肢,建立人胶质瘤细胞移植瘤裸鼠模型,待肉眼可见成瘤后腹腔注射生理盐水、IONP@PTX、IONP@PTX联合3-MA或IONP@PTX联合雷帕霉素,监测肿瘤生长情况及裸鼠体重变化,治疗结束后剥离肿瘤,提取肿瘤组织蛋白检测铁死亡标志物的表达;同时取未接瘤裸鼠腹腔注射生理盐水、IONP@PTX、IONP@PTX联合3-MA或IONP@PTX联合雷帕霉素,治疗结束后取材测量各组裸鼠的肝脏和脾脏重量,计算肝脾指数,检测IONP@PTX对生物体的毒性作用。结果:紫外-可见光吸收光谱分析结果表明PTX成功负载于IONP,载药量为1mg/ml IONP@PTX溶液包含273.5μg紫杉醇,且在12小时内从IONP@PTX快速释放。粒径分析及TEM结果表明IONP@PTX水合粒径约为36 nm,核心粒径约为10 nm,Zeta电位为-29±7.65 m V。与PTX相比,IONP@PTX对HMC3细胞的毒性较小,而对U251细胞毒性较大;并能明显抑制U251细胞的迁移、侵袭能力,增加细胞内铁离子浓度、ROS和脂质过氧化水平,自噬相关蛋白Beclin1的表达水平显著升高,并且铁死亡相关蛋白GPX4的表达水平明显下降（P＜0.05）。体内实验表明,IONP@PTX明显抑制GBM移植瘤的生长,并降低肿瘤组织中GPX4蛋白的表达水平（P＜0.05）。各组肝脾指数均无明显差异,说明IONP@PTX对GBM移植瘤裸鼠无明显的毒性作用。另外,体内外实验均表明,自噬抑制剂3-MA可明显降低IONP@PTX对GBM的抑制作用,而自噬促进剂雷帕霉素可明显增强抑制作用（P＜0.05）。结论:紫杉醇氧化铁纳米粒子通过诱导铁死亡抑制胶质母细胞瘤生长,且与自噬途径相关。
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