【摘 要】
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目的:观察钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的同工型CaMKⅡγ和CaMKⅡδ对鼠神经元细胞缺血缺氧损伤的影响,并探究其作用的信号通路。方法:分离胚胎期第18天幼鼠大脑用于原代神经元,在5%CO2、37℃的条件下培养。在接种细胞的同时,以小干扰核糖核酸分别转染si-NT、si-CAMK2G-1、si-CAMK2G-2、si-CAMK2D1、si-CAMK2D2,放入 37℃缺氧箱内充入5%CO
【基金项目】
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广东省自然科学基金项目（2019A1515011190）；
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目的:观察钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的同工型CaMKⅡγ和CaMKⅡδ对鼠神经元细胞缺血缺氧损伤的影响,并探究其作用的信号通路。方法:分离胚胎期第18天幼鼠大脑用于原代神经元,在5%CO2、37℃的条件下培养。在接种细胞的同时,以小干扰核糖核酸分别转染si-NT、si-CAMK2G-1、si-CAMK2G-2、si-CAMK2D1、si-CAMK2D2,放入 37℃缺氧箱内充入5%CO2+95%N2培养1h。在体外氧葡萄糖剥夺（OGD/R）后恢复原培养条件0-72h。通过钙黄绿素和碘化丙啶染色评估各组之间神经元细胞的存活率。通过对神经元裂解物行免疫蛋白印迹检测磷脂酰肌醇-3-激酶/细胞外信号调节激酶（PI3k/Akt/Erk）信号通路构件的表达量。同时,采用小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型验证。结果:MCAO増加小鼠脑CaMKⅡδ和CaMKⅡγ的表达并激活了 PI3K/Akt/Erk信号通路。CaMKⅡδ和CaMKⅡγ在MCAO造模成功再灌注后24、48、72和96h持续上调,且 Erk、Phospho-Erk、Akt、Phospho-Akt（Ser473）的表达均上调。敲减CaMKⅡγ显著降低大鼠神经元细胞的生存率。以si-CAMK2G敲减CaMKⅡγ可逆转OGD/R介导的大鼠神经元细胞CaMKⅡγ表达上调。敲减CAMK2G的胎鼠神经元细胞在OGD/R12h,24h,48h,72h的生存率明显降低。敲减CaMKⅡγ或CaMKⅡδ可抑制PI3K/Akt/Erk信号通路表达上调。转染si-CaMK2G、si-CaMK2D的神经元细胞与转染si-NT的神经元细胞比较,Erk、磷酸化Erk、Akt、磷酸化Akt（pS473-Akt）的表达上调明显抑制。结论:CaMKⅡγ和CaMKⅡδ在神经元细胞发生缺血缺氧损伤时具有神经保护作用,该保护作用可能是通过PI3K/Akt/Erk信号通路介导的。
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