阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种多因素的神经退行性疾病,其主要病理学特征包括由β-淀粉样蛋白沉积形成的老年斑以及Tau蛋白过度磷酸化形成的神经纤维缠结,从而导致认知功能障碍、记忆力减退以及行为异常等症状。目前针对AD的防治主要是基于对其某单一病因和症状的控制,这种方法往往难以奏效,且副作用较大。而采用对AD的多个靶标,多个节点蛋白同时进行干预进而调节整个AID病因网络相关靶点,才有可能达到最佳治疗效果。通过调节固有免疫系统的TLRs/MyD88信号通路,既可增加对Ap的清除,维持脑中Ap的正常平衡和减少Ap的聚集,又能通过影响AD病因网络中的相关靶点,减缓导致AD产生和发展的因素,从而有效的防治AD。本课题拟设计出一系列新型的作用于配体蛋白MyD88的非肽类小分子化合物,并对其进行相关的药理活性评价,并为通过调节固有免疫系统达到防治AD提供必要的理论依据和实验依据。主要研究内容及结果如下：1.作用于TLRs信号通路关键信号分子MyD88的化合物的设计利用Catalyst软件,参考MyD88的三维空间构型、作用机制(二聚化)以及一个作用于配体蛋白MyD88的拟肽类化合物ST2825的作用情况,构建了相应的作用于MyD88的最佳药效团模型,并据此模型设计了一系列与药效团模型匹配较好并具有良好预测活性的化合物(2-哌啶酮衍生物及2-氨基噻唑衍生物)。分子对接结果显示化合物通过改变MyD88的构象以及电子云密度而起到抑制MyD88二聚化的作用。2.化合物的合成及结构解析根据化合物结构特征,设计出最佳合成路线,得到两类共46个化合物。利用UV、IR、1H-NMR、13C-NMR和MS对合成出的目标化合物进行结构表征,同时通过HPLC对其进行纯度检测。3.药理活性评价3.1 Aβ聚集抑制活性筛选硫磺素T荧光筛选实验结果表明,两类化合物大多具有良好的抑制Aβ1-42自聚集的活性,且抑制作用具有浓度依赖性,氨基噻唑类化合物P2(84.48±0.41%)显示出了最好的抑制活性。AFM成像实验表明,化合物能够改变Aβ1-42自聚集状态,有效地抑制Aβ1-42纤维化聚集形成淀粉样沉积物。3.2化合物对促炎性细胞因子作用研究促炎性细胞因子实验结果表明两类化合物能够有效地抑制LPS诱导小胶质细胞释放促炎性细胞因子。哌啶酮类化合物L15能够显著降低三种促炎性细胞因子的含量,针对TNF-a,IL-1β和IL-6,其IC50值分别为0.076±0.02州,0.207±0.06μM和0.028±0.01μM。3.3 SH-SY5Y细胞保护活性筛选在细胞保护试验中,氨基噻唑衍生物对H2O2、Aβ以及炎症诱导SH-SY5Y细胞损伤均显示出了一定的保护作用,而哌啶酮衍生物只对炎症介导的神经毒性诱导SH-SY5Y细胞损伤表现出保护作用。化合物P2对H202诱导SH-SY5Y细胞损伤具有最佳保护作用,ECs0为0.1858μM；浓度为10州时,对Ap诱导SH-SY5Y细胞损伤显示出良好的的保护作用,细胞的存活率达到79.22±3.22%；浓度为5州时,对炎症诱导SH-SY5Y细胞损伤也表现出较好的活性,细胞的存活率达到81.88%。3.4免疫共沉淀试验Co-IP实验结果表明所设计的两类化合物都能够与MyD88相互作用,抑制MyD88的二聚化,且这种抑制作用表现出一定的浓度依赖性。药理活性筛选结果表明,设计的两类化合物均能通过作用于TLRs/MyD88信号通路,并且影响AD病因网络中多个相关靶点而发挥多功能的作用,可以作为治疗AD的潜在药物进行深入研究,并且为开发治疗神经退行性疾病药物提供了新策略。论文研究特点及创新之处思路比较新颖,从固有免疫系统对于中枢神经系统的影响入手,探讨固有免疫系统的TLRs/MyD88信号通路对AD病因网络相关靶点的作用,为AD的预防和治疗提供了新的研究思路和途径。设计的两类化合物均为首次得到的作用于TLRs/MyD88信号通路的非肽类化合物,研究侧重点属于多靶点应用范畴。