猪血红蛋白源多肽（Pig hemoglobin peptide,PHP）PHP1（VVYPWT）与PHP2（TKTYFPHF）是本研究前期得到的血管紧张素Ⅰ转换酶（AngiotensinⅠ-Converting Enzyme,ACE）抑制肽。本文以PHP1和PHP2作为研究母肽,利用丙氨酸扫描文库技术结合生物活性预测工具对研究母肽进行定向改造,设计新型多肽类ACE抑制剂（ACE Inhibitory Peptides,ACEIP）,以筛选高ACE抑制活性多肽,研究多肽序列中氨基酸种类、疏水性、带电性及空间位阻等性质对其活性的影响,探究ACE抑制肽的构效关系。本研究对PHP1和PHP2进行丙氨酸扫描诱变构建了丙氨酸扫描文库,经Peptide Ranker预测分析筛选出了母肽序列中的可突变位点并对其进行氨基酸替换,设计了19个新型多肽类似物并进行了生物信息学预测。生物活性预测结果显示,多肽类似物均具备潜在的生物活性。应用固相合成法（Solid-Phase Peptide Synthesis,SPPS）对母肽及其类似物进行合成,建立反向高效液相色谱（Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography,RP-HPLC）制备及分析方法对合成肽进行了分离纯化,经电喷雾质谱（Electrospray Ionization Mass Spectrometry,ESI-MS）鉴定了目标合成物分子量,纯品肽纯度均＞95%。本研究对母肽及设计肽的体外ACE抑制活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性进行了考察,并通过分子对接进一步分析了ACE抑制肽与ACE的构效关系。结果表明,多肽类似物均具有较高的ACE抑制活性,其中PHP1A-6、PHP2A-3、PHP2A-4和PHP2A-7的ACE抑制活性最高,IC50分别为3.87、3.33、2.86、4.58μmol/L,较母肽有显著性提高,PHP1A-3、PHP1A-4、PHP1A-7、PHP2A-1和PHP2A-10具有同母肽相当的抑制活性,IC50＜10μmol/L,当多肽N-端氨基酸残基替换为疏水性越强的Leu、Ile或者空间位阻小的Gly和Ala时,其ACE抑制活性增强,改变母肽PHP2的C-端His残基对活性影响较大;绝大部分多肽类似物的α-葡萄糖苷酶抑制活性与母肽相比均有明显提高,PHP1A-3、PHP1A-7、PHP2A-6、PHP2A-11和PHP2A-12的活性最高,IC50分别为3.09、9.51、5.58、2.35、3.98μmol/L;其中,PHP1A-3和PHP1A-7具备较强的ACE抑制和α-葡萄糖苷酶抑制双重活性;N-端含Cys残基的多肽类似物在1 mg/m L浓度下,ABTS+自由基清除率均在85%以上,具备潜在的抗氧化活性;分子对接表明PHP1A-6主要占据ACE的S1活性位点,PHP2A-3、4、7同时占据了ACE的三个活性位点S1,S1’和S2,与ACE的氨基酸残基产生了多个稳定的氢键、疏水相互作用、π-π堆积及盐桥,增加了对ACE的抑制作用。