自凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)被引进我国后,近几年来成为养殖规模和产量最大的对虾品种。伴随着从国外引进凡纳滨对虾亲虾及虾苗,桃拉综合征病毒也随之传播到国内,危害也日趋严重。白斑症病毒自1993年大规模暴发以来,一直是对虾养殖中的主要病毒病。这两种病毒病对对虾养殖的危害也愈发严重,并有混合感染引起大规模死亡的情况发生。 2003年10月,青岛胶州市对虾养殖场养殖的凡纳滨对虾发生大规模死亡,死亡率达90%。发病对虾体长3-5cm,主要发病症状为肝胰腺肿大,继而发黄,变红。头胸甲易剥离,其上有白斑。对虾不摄食,随即出现大规模死亡。通过流行病学研究,发病对虾既具有白斑病的典型症状,又具有桃拉病毒的典型症状。本文通过组织病理学,病毒纯化和PCR的方法对发病虾进行了研究。 通过组织病理学研究,发现其上皮结构病变明显,肝胰腺和中肠坏死严重,细胞核脱落,固缩,出现强嗜碱性颗粒。鳃组织中细胞核肿胀。通过超微病理分析,在鳃中发现WSSV病毒粒子,而肝胰腺中未发现病毒粒子。 本实验通过不连续蔗糖密度梯度的方法,分离、纯化了TSV和WSSV两种病毒粒子,Taura病毒粒子主要存在于20%与30%蔗糖梯度带之间,WSSV病毒粒子主要存在于46%与52%蔗糖梯度带之间。 通过免疫荧光抗体技术(IFAT)和PCR的方法从中检出白斑综合症病毒(WSSV),同时利用RT-PCR的方法在同一批病虾体内检出桃拉综合症病毒(TSV)。并设计了多重PCR的体系,可快捷、准确的检测桃拉病毒和白斑病毒。