论文部分内容阅读
动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)斑块的破裂继发冠脉内血栓形成被认为是大多数急性冠脉综合征发病的主要原因。不稳定斑块的特点是含有巨大的脂核、大量的炎症细胞以及纤薄的纤维帽。斑块纤维帽的结构和强度，以及斑块内与炎症过程有关的单核／巨噬细胞的活性状态对斑块的稳定性起主要作用。斑块纤维帽中能抵抗破裂的主要成分是基质胶原。减少胶原的合成及／或增加胶原裂解的因素都可削弱斑块的稳定性。与斑块破裂有关的基质降解主要是基质金属蛋白酶(MMPs)。 Tenascin-C是一种大分子的细胞外基质糖蛋白。包含多个表皮生长因子样、纤维结合素Ⅲ型重复子以及纤维蛋白原样的多功能亚单位。从而使Tenascin-C具有影响细胞增殖、分化和迁移等多种功能。Tenascin-C在正常成人组织中分布相当有限，但在胚胎器官的发生、肿瘤生成、炎症反应以及伤口愈合情况下可局限的再表达。本研究的目的是观察Tenascin-C在AS病变中的表达模式，并探讨Tenascin-C与AS病变稳定性间的关系。 实验方法：(1)采用高脂膳食结合腹腔注射维生素D3的方法，建立大鼠AS病变的模型；(2)运用免疫组化和RT—PCR的方法，观察Tenascin-C在AS病变中的表达，及其与病变范围和动脉组织胆固醇含量的关系；(3)在体外，分离培养大鼠血管平滑肌细胞和腹腔巨噬细胞，观察了oxLDL等刺激因子对以上两种细胞分泌表达Tenascin-C的影响；(4)运用Western blot、Zymography以及Northern blot的方法，观察Tenascin-C和Fibronectin对大鼠腹腔巨噬细胞活性，以及MMP-2,-9活性和表达水平的影响。 主要结果：(1)高脂膳食结合维生素D3负荷的大鼠，在饲养30和90天一后（D30和 D90天组），血清 TC、TG和 LDL—C水平，以及主动脉组织中胆固醇的含量均较对照组明显升高（P＜0．01）；其中＊90天组又明显高于030天组。病理学观察发现主动脉病变部位内膜增厚，内膜下有大量泡沫细胞形成；而单纯给予维生素D负荷组，只出现以平滑肌细胞增生为主的内膜增厚。（2）免疫组化及RT—PCR结果显示，在正常大鼠的主动脉无Tenascin．C的表达，在AS病变处有Tenascin－C的高表达，主要定位于动脉壁AS病变的中膜；直线相关分析结果显示：Tenascin－C mRNA的表达水平与主动脉病变相对面积及组织胆固醇含量的大小密切相关。（）静止的大鼠腹腔巨噬细胞和主动脉平滑肌细胞几乎不表达Tenascin－C，。xLDL等刺激因子可上调Tenascin－C蛋白的表达，并呈明显的浓度依赖性：RT－PCR检测结果显示，加入 OXLDL 2 ’J’时后即有Tenascin－C mRNA的表达，6 ’J’时时达高峰，并可持续到 24 ’J’时。（4）Tenascin－C和 Fibronectin可使大鼠巨噬细胞的活性明显增加，与对照组相比相差显著 （WO．05人分离培养的大鼠腹腔巨噬细胞，只表达有活性的 MMP习。Tenascin（明显增加 MMP－9活性和蛋白的表达（约为对照组的 3倍），以 Tenascin．C ＋Fibronectin组增加的最为显著。各组对MMP－2的蛋白表达无明显影响。而Fibronectin组 MMPg活性及蛋白的表达与对照组相比无明显差异。Northom blot结果显不 Fibronectin、Tenascin－C和 Tenascin－C＋Fibronectin三组对大鼠腹腔巨噬细胞＊T．＊＊P、＊M卜2＊KN A表达无明显差异：nh。＊＊0h组不诱导大鼠巨噬细胞 MMP－9 mRNA的表达，Tenascin－C和 Tenascin－C十 Fibronectln组可上调 MMP－9 InRNA的表达。 结 论：（）给予大鼠高脂膳食的同时加维生素D负荷，可形成与人类相似的粥样硬化病变。（二）Tenascin．C可在大鼠 AS病变局部表达，其 mRNA表达水平与主动脉病变面积以及组织胆固醇含量密切相关，并与病变严重程度相一致。（3）在。XLDL等刺激因子的作用下，大鼠平滑肌细胞和巨噬细胞可高表达Tenascin．c。OxLDL上调Tenascin－C与其在转录水平影响Tenascin－C基因表达有关。（4）Tenascin－C可使大鼠巨噬细胞活性增加。Tenascin．C不但可增加大鼠腹腔巨噬细胞MMPg蛋白和 mRNA的表达，而且可显著增加 MMP－9的活性。而Fibronectin对MMPg 的表达及活性无明显影响。Tenascin．C 和 3Tenascin－。与动脉粥样硬化病变稳定性关系的实险研究 中文摘要Fibronectin在对MMPg表达及活性的上调方面具有协同作用。（5）以上结果表明：Tenascin－C是AS病变中的特有成分，激活的平滑肌细胞和巨噬细胞都可合成＊＊n＊sdn－C：＊＊＊删h－C可能具有与其它细胞外基质糖蛋白不同的作用。＊S病变中Tenascin－C表达的上调，可能会通过增加巨噬细胞活性并上调MMP－9的表达和活性，削弱斑块的稳定性而使斑块易于破裂。