论文部分内容阅读
目的:研讨鹿茸多肽(VAP)改善认知障碍的作用及其机制。 方法:(1)体外实验:采用过氧化氢损伤SH-SY5Y细胞,建立细胞损伤模型,分为空白组、模型组和鹿茸多肽低剂量组(VAP1组)、鹿茸多肽中剂量组(VAP2组)、鹿茸多肽高剂量组(VAP3组),通过MTT法检测VAP对SH-SY5Y细胞存活率的影响,利用流式细胞术检测VAP对SH-SY5Y细胞凋亡的影响,通过Western blotting技术测定SH-SY5Y细胞内Bcl-2、BAX和Caspase-3蛋白的表达水平;(2)体内实验:选取ICR小鼠,采用氢溴酸东莨菪碱(SCOP)腹腔注射建立认知障碍模型小鼠,分为空白组、模型组、阳性组、鹿茸多肽低剂量组(VAP1组)、鹿茸多肽中剂量组(VAP2组)、鹿茸多肽高剂量组(VAP3组),采用Morris水迷宫和跳台实验检测小鼠行为学,HE染色观察VAP对小鼠海马神经元形态的影响,TUNEL染色法检测VAP对小鼠海马神经元凋亡的影响,检测血清中T-SOD、MDA、GSH-PX、及脑中ACH及CHAT的活性,ELISA法检测脑中ACTH、CORT的活性,利用Western blotting与Real Time PCR技术测定小鼠神经元中BcL-2、BAX、Caspase-3、GR、MR及CRH的表达水平。 结果:(1)VAP能提高过氧化氢致SH-SY5Y细胞损伤的存活率(P<0.05),抑制SH-SY5Y的凋亡情况(P<0.05),上调Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.05),下调BAX和Caspase-3蛋白的表达水平(P<0.05);(2)通过水迷宫实验发现,VAP能减少认知障碍模型小鼠逃避潜伏期和逃避路程(P<0.05);通过跳台实验发现,VAP能增加认知障碍小鼠的潜伏期(P<0.05),减少小鼠错误次数(P<0.05); VAP能维持小鼠海马神经元的完整性和排列紧密度,抑制核固缩,减少小鼠海马区神经元的凋亡,增加GSH-PX、ACH、CHAT的含量及T-SOD的活性(P<0.05),降低MDA、ACTH及CORT的活性(P<0.05),通过WesternBlotting及Real Time PCR实验表明,VAP能够上调小鼠海马区神经元内BcL-2蛋白的表达水平(P<0.05),下调BAX、Caspase-3、GR、MR和CRH蛋白的表达水平(P<0.05)。 结论:VAP能够增加ACH、CHAT的含量,VAP通过调控HPA轴所释放的各激素水平,降低GR、MR和CRH以及降低ACTH、CORT的活性,抑制神经元凋亡,对认知障碍模型小鼠具有保护神经元作用,从而达到防治认知障碍的目的。