论文部分内容阅读
目的:观察促血管新生因子:血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管新生因子抑制因子:与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)在Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)点突变(JAK2V617F)阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者骨髓中的表达水平,探讨它们与血管新生之间的相互关系。方法:1本研究所用的52例石蜡标本均取自保定市第一医院病理科,选取自2012年1月至2014年10月保定市第一医院门诊及住院收治的42例JAK2V617F表达阳性的MPN患者及10例特发性免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者。MPN患者包括真性红细胞增多症(PV)10例,原发性血小板增多症(ET)17例,原发性骨髓纤维化(PMF)15例,其中男18例,女24例,年龄32~75岁,中位年龄57岁。ITP患者包括男5例,女5例,中位年龄40岁。所选取患者的诊断均符合《血液病诊断及疗效标准》,患者均知情同意及经保定市第一医院伦理委员会批准。2实验分组:JAK2V617F阳性的MPN患者中初治组(初诊未治疗组)25例;治疗组(该组患者均应用干扰素-α2b(IFN-α2b)肌肉或皮下注射,300万U/次,3~7次/周,至少应用6个月以上,联合或不联合应用羟基脲调整外周血白细胞、血红蛋白及血小板数量。)17例。10例特发性免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者作为对照组。3通过实时荧光定量PCR检测MPN患者JAK2V617F突变量(突变型与野生型JAK2比值)。4应用免疫组化方法检测初治组、治疗组及对照组患者骨髓病理切片p-JAK2、VEGF、HIF-1α、PTEN的蛋白表达水平及CD105标记的微血管密度(MVD)。5所有数据均采用SPSS 17.0统计分析软件,计量资料以(x±s)表示,两组均数间的比较采用t检验,多组均数比较采用方差分析,两两比较采用q检验。spearman等级相关分析各变量之间的相关性。jak2v617f突变阳性中jak2v617f突变量、vegf、hif-1α、mvd表达的比较及四指标与临床特征(血栓栓塞发生率)的关系分析采用χ2检验;p<0.05为差异有统计学意义。结果:1mpn患者的jak2v617f突变量pcr结果显示:42例mpn患者在初次诊治时均经实时荧光定量pcr检测显示jak2v617f突变为阳性,经过治疗后jak2v617f突变转阴性者2例,其余40例mpn患者jak2v617f突变量在26.8%-75.4%之间。其中初治组25例,jak2v617f突变量为46.17%±19.32%,干扰素治疗组17例,jak2v617f突变量为22.69%±12.64%,前者明显高于后者(p<0.05)。2免疫组织化学染色检测p-jak2、vegf、hif-1α、pten、mvd在mpn患者中的表达水平p-jak2、vegf、hif-1α及pten蛋白均表达于细胞质,其中p-jak2、vegf、hif-1α三者骨髓细胞中阳性率在初治组(82.41%±11.65%;64.72%±25.01%;45.12%±20.28%)中表达最高,其次为治疗组(60.93%±20.57%;36.58%±15.95%;32.15%±14.27%),对照组(43.05%±12.59%;25.69%±13.75%;25.07%±15.49%)最低,差异均有统计学显著性(p<0.01);mvd在初治组(26.58%±5.93%)中显著高于治疗组(15.86%±4.27%)及对照组(10.76%±4.01%),pten蛋白在初治组(24.78%±14.86%)中表达最低,其次为治疗组(38.72%±18.25%),对照组表达(55.05%±21.17%)最高,差异均有统计学意义(p<0.01)。3jak2v617f突变量与p-jak2、vegf、hif-1α、pten、mvd相关分析spearman等级相关分析显示mpn患者的jak2v617f突变量和p-jak2、vegf、mvd正相关(r=0.739,p<0.01、r=0.589,p<0.05、r=0.577,p<0.05),与hif-1α无明显相关(p>0.05),与pten负相关(r=-0.508,p<0.05)。pten蛋白表达与mvd负相关(r=-0.584,p<0.05)。以jak2v617f/jak2比值50%为界值分为<50%与≥50%两组,其中<50%组26例,≥50%组16例。结果显示jak2v617f/jak2<50%的患者其p-jak2、vegf、hif-1α及mvd(65.15%±17.59%、43.26%±18.67%、33.27%±15.26%、19.16%±5.34%)的水平均明显低于jak2v617f/jak2≥50%组(89.76%±20.56%、69.87%±27.32%、49.51%±22.65%、34.19%±6.57%),pten在jak2v617f/jak2比值<50%患者的水平(34.42%±19.76%)要明显高于jak2v617f/jak2比值≥50%(22.68%±13.12%)患者(p均<0.05)。初治组中(46.17%±19.32%;82.41%±11.65%;64.72%±25.01%;45.12%±20.28%;26.58%±5.93%)jak2v617f突变量及p-jak2、vegf、hif-1α、mvd的水平均明显高于ifn-α2b治疗组(22.69%±12.64%;60.93%±20.57%;64.72%±25.01%;32.15%±14.27%;15.86%±4.27%;15.86%±4.27%)及对照组(0;43.05%±12.59%;25.69%±13.75%;25.07%±15.49%;10.76%±4.01%)(p均<0.05);而pten与上述相反,在初治组(24.78%±14.86%)中表达最低,其次为治疗组(15.86%±4.27%),在对照组(10.76%±4.01%)中表达最高(p均<0.05)。4jak2v617f及mvd与血栓栓塞的相关性42例患者,初治组25例,血栓栓塞15例,血栓发生率为60.00%;治疗组17例,再发血栓栓塞4例(既往发生血栓者不计在内),血栓发生率为23.53%;后者明显低于前者(χ2=5.43,p<0.05)。42例mpn患者中19例患者发生血栓,血栓发生率为45.24%,其中26例jak2v617f/jak2比值<50%组,发生血栓栓塞者8例,血栓发生率为30.77%,16例≥50%组,发生血栓栓塞者11例,血栓发生率为68.75%,后者明显高于前者(χ2=5.77,p<0.05)。42例患者总vegf为53.40%±21.97%,其中vegf<53.40%患者24例,血栓栓塞7例,血栓发生率为33.33%,vegf>53.40%患者18例,血栓栓塞12例,血栓发生率为66.67%,后者明显高于前者(χ2=5.84,p<0.05)。42例患者总hif-1α为39.46%±18.08%,其中hif-1α<39.46%患者22例,血栓栓塞6例,血栓发生率为31.82%,hif-1α>39.46%患者20例,血栓栓塞13例,血栓发生率为60.00%,后者明显高于前者(χ2=6.02,p<0.05)。42例患者总mvd为22.24±7.49,其中mvd<22.24患者23例,血栓栓塞7例,血栓发生率为为30.43%,mvd>22.24患者19例,血栓栓塞12例,血栓发生率为63.16%,后者明显高于前者(χ2=4.50,P<0.05)。结果表明,经干扰素治疗后,随着JAK2V617F突变量的减低,患者血栓栓塞发生率亦减低;JAK2V617F突变量愈高,MVD愈高,VEGF表达越高,HIF-1α表达越高,患者血栓栓塞发生率愈高,呈正相关关系。结论:1 PTEN、VEGF、HIF-1α与JAK2V617F共同参与了骨髓增殖性肿瘤患者血管新生。2 JAK2V617F阳性MPN患者在应用IFN-α2b治疗后JAK2V617F突变量明显减少,部分患者转阴性,IFN-α2b能够抑制MPN患者JAK2V617F突变量。3 VEGF、HIF-1α及MVD在JAK2V617F阳性患者中表达增加,而PTEN表达减低。4 JAK2V617F基因突变量越高者VEGF、HIF-1α、MVD越高则血管新生越明显,而与PTEN表达负相关。5 JAK2V617F突变量愈高,VEGF表达越高,HIF-1α表达越高,骨髓微血管密度愈高,患者发生血栓风险则愈高,随着JAK2V617F突变量的减低,患者血栓栓塞发生率亦减低。