【摘 要】
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目的:本研究以南蛇簕二氯甲烷萃取物（DECH）为研究对象,通过HepG2肝癌细胞体外实验和H22荷瘤小鼠体内实验,探讨DECH抗肝癌作用,并通过急性经口毒性试验对其进行安全性评价。方法:（1）采用MTT法对南蛇簕水、甲醇、二氯甲烷及石油醚提取物的抗肿瘤活性进行筛选;采用Hoechst33258染色实验观察HepG2细胞给药后细胞形态的变化;采用划痕实验观察药物对HepG2细胞迁移能力的影响;采用流
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目的:本研究以南蛇簕二氯甲烷萃取物（DECH）为研究对象,通过HepG2肝癌细胞体外实验和H22荷瘤小鼠体内实验,探讨DECH抗肝癌作用,并通过急性经口毒性试验对其进行安全性评价。方法:（1）采用MTT法对南蛇簕水、甲醇、二氯甲烷及石油醚提取物的抗肿瘤活性进行筛选;采用Hoechst33258染色实验观察HepG2细胞给药后细胞形态的变化;采用划痕实验观察药物对HepG2细胞迁移能力的影响;采用流式细胞术检测药物浓度及给药时间对HepG2细胞生长周期、凋亡的影响。（2）通过构建H22肝癌荷瘤小鼠模型,观察DECH对小鼠体重,一般情况,抑瘤率,免疫脏器指数,AFP、IL-6,肝肾功能的影响及肿瘤组织病理形态的变化。（3）通过急性经口毒性试验,评价DECH安全性。结果:1.体外实验1.1南蛇簕有效部位的活性筛选:南蛇簕水、甲醇、二氯甲烷、石油醚提取物在浓度为100μg/mL时对HepG2细胞抑制率分别为7.37%、25.22%、77.49%、67.80%。1.2增殖作用:DECH在给药12、24、48h的IC50值分别是43.34±3.46、32.61±1.60、27.68±1.23μg/mL,对HepG2的生长抑制呈时间和剂量依赖性。1.3形态学观察:Hoechst染色实验发现给药组细胞随着DECH浓度的增加,细胞核皱缩变形,边聚裂解,甚至裂为碎块,产生凋亡小体。1.4迁移能力:HepG2细胞的迁移能力随着给药浓度的增加逐渐下降,呈现剂量依赖关系。1.5细胞周期和凋亡:流式细胞术PI单染法发现高剂量DECH可阻滞细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法发现DECH能够诱导HepG2细胞的早期凋亡。2.体内实验2.1体重:与模型对照组相比,DECH各剂量组体重增加,DECH低剂量组显著增加（P＜0.05）。2.2一般情况:模型对照组小鼠左上肢行动不便,活动减少,反应迟钝,皮毛稀疏暗淡无光泽,DECH各剂量组以上情况有所改善。2.3抑瘤率:DECH低、中、高剂量组的抑瘤率分别为27.87%、39.71%、53.22%。2.4免疫脏器指数:与正常对照组相比,其他各组的胸腺指数均显著减少（P＜0.01）;模型对照组及DECH各剂量组脾脏指数显著升高,CTX组显著降低（P＜0.01）;与模型对照组相比,CTX组的胸腺指数、脾脏指数显著降低（P＜0.01）,DECH高剂量组胸腺指数显著升高（P＜0.05）;DECH中、高剂量组脾脏指数显著升高（P＜0.01）。2.5 AFP含量:与正常对照组相比,CTX组降低,其他各组均有所升高,除DECH高剂量组,其余各组均有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）;与模型对照组相比,CTX组、DECH高剂量组显著减低（P＜0.05或P＜0.01）。2.6 IL-6含量:与正常对照组相比,模型对照组及DECH低剂量组含量显著升高（P＜0.05）;与模型对照组相比,DECH各剂量组和CTX组的IL-6含量显著降低（P＜0.01）。2.7肝肾功能:与正常对照组比较,模型对照组ALT、AST及CRE含量显著升高（P＜0.01）,BUN有所上升,无统计学差异（P＞0.05）;DECH各剂量组的AST及CRE均显著升高（P＜0.01）,BUN显著降低（P＜0.01）,DECH高剂量组的ALT显著升高（P＜0.05）,CTX组BUN显著降低（P＜0.01）。与模型对照组相比,DECH各剂量组的AST及BUN显著降低（P＜0.05或P＜0.01）,低、中剂量组的ALT含量显著降低（P＜0.05）,CTX组的ALT、AST、BUN、CRE含量均降低且有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）。2.8 HE染色:模型对照组可见大量肿瘤细胞,排列密集,大小不一并且有显著的异型细胞核,有的呈现花环状;CTX和DECH各剂量组肿瘤细胞数目减少,排列较为稀疏,并出现不同程度的细胞坏死。3.安全性评价:MTD＞541.52 g/kg,相当于临床用量的277.7倍。结论:1.DECH通过抑制细胞增殖、降低细胞迁移能力、阻滞细胞周期等来发挥对HepG2肝癌细胞的抑制作用;2.DECH通过提高免疫器官指数、改善肝肾功能、降低AFP及IL-6含量、改善肿瘤组织病理形态等来发挥对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用;3.DECH安全,无明显急性毒性作用。
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