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肝损伤是临床常见的病理症状,许多因素如酒精、药物、病毒等均能导致肝损伤的产生,若诊治不当,会导致严重后果。目前,临床尚缺乏理想的预防药物。乳酸菌具有多种保健功能,已广泛地应用到食品和医药中,因此筛选获得对肝损伤具有保护作用的乳酸菌为相关保健食品应用奠定基础。本文对不同来源样品中筛选获得的乳酸菌,通过体外抗氧化活性,抑菌能力及破坏内毒素能力研究,筛选获得具有良好特性乳酸菌,并以急性酒精性肝损伤小鼠进行验证。1.研究了不同乳酸菌SOD活性。对本实验分离保藏的58株乳酸菌的SOD活性进行了比较,有12株乳酸菌发酵液SOD活性较高,超过了24.45U/mL,分别为:RS5、C8M、AP3、GP1、ST1、BF、绿杆、白杆、Lr-4、R26、F、LV108,而ST1的SOD活性最高,达到30.01U/mL。从长寿老人粪便中分离的菌株（除R02）SOD活性普遍较高,均超过24U/mL;从腐乳中分离的菌株活性普遍较低,活性最高仅为14.90U/mL（W4M）。2.研究了12株乳酸菌清除DPPH自由基能力。由清除DPPH自由基能力曲线来看,各菌株的清除能力均不强。比较而言ST1清除能力相对最强,清除DPPH自由基能力曲线为y=12.53x+10.78,清除50%自由基时,所需消耗的发酵液浓度仅为3.13%,其次为GP1,发酵液浓度为3.34%,BF,发酵液浓度为3.37%,绿杆,发酵液浓度为3.39%,AP3清除能力最弱,发酵液浓度为4.26%。3.研究了12株乳酸菌总抗氧化能力。通过研究发现,菌株GP1总抗氧化能力最强,发酵18h时达到17.35U/mL,其次为ST1,发酵18h时达到16.39U/mL,绿杆,发酵24h时达到15.92U/mL,BF,发酵18h时达到15.05U/mL,而C8M总抗氧化能力最低仅为8.37 U/mL。发酵时间对各菌株抗氧化活性影响较大,大部分菌株在12h至18h,抗氧化活性呈上升趋势,在18h至24h之间,抗氧化活性比较强,趋于比较稳定的阶段,24h后呈下降趋势。细胞破碎后各菌株的抗氧化能力均有所提高,菌株ST1提高的程度最大,总抗氧化能力上升了3.07U/mL,而AP3仅提高了0.14U/mL。4.研究了12株乳酸菌的抑菌能力。通过比较抑菌能力,有6株乳酸菌抑菌能力较强,分别为:GP1、ST1、BF、绿杆、LV108、Lr-4。其中,GP1抑制大肠杆菌能力最强,抑菌直径达到23.5mm,其次为Lr-4,抑菌直径为22.75mm,最弱为C8M和白杆,抑菌直径为19.75mm;GP1和F抑制沙门氏菌能力最强,抑菌直径达到26.75mm,其次为BF、ST1、Lr-4,抑菌直径为26mm,最弱为C8M,抑菌直径为24mm。调节pH值至6后,AP3、C8M、F、RS5失去抑菌能力,但其余菌株仍具有一定的抑菌效果,GP1抑菌能力仍最强,抑制大肠杆菌直径为13.50mm,抑制沙门氏菌直径为14.00mm。5.研究了抗氧化能力及抑菌能力均较强的6株乳酸菌破坏内毒素能力。结果显示,各菌株代谢产物直接破坏内毒素能力弱。当内毒素浓度为0.5eu/mL时,阳性对照OD值为0.376,此时破坏能力最强的绿杆OD值为0.316;当内毒素浓度为1eu/mL时,阳性对照OD值为0.627,此时破坏能力最强的BF的OD值为0.488,内毒素的残留量仍很高;当内毒素浓度为2eu/mL时,阳性对照OD值为1.11,而此时破坏能力最强的绿杆OD值为0.767,破坏效果仍不明显。而与内毒素共培养时乳酸菌破坏内毒素能力均具有明显效果且随着培养时间的延长破坏能力不断增强。GP1在培养24h时OD下降到0.19,BF、绿杆、ST1OD值也分别下降到0.27、0.28、0.35,而阳性对照OD值高达0.82。并且发现内毒素与乳酸菌共培养时,对乳酸菌生长影响不大。6.对筛选获得的菌株绿杆、GP1和ST1进行了鉴定。通过API系列鉴定条和16S rDNA基因测序与BLAST在线比对,发现API系列鉴定与分子鉴定结果一致。得出绿杆、GP1、ST1分别为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）、嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）。7.对筛选获得的菌株以急性酒精肝损伤小鼠进行验证。乳酸菌表现出保护肝脏损伤的特征,乳酸菌组与模型组血清中谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）和肝脏中丙二醛（MDA）、还原性谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、乙醇脱氢酶（ADH）水平比较,差异显著（P<0.05）,有效的保护了肝脏。普通乳酸菌对照C8M的护肝特性总体上不如GP1、绿杆、ST1、BF（阳性对照）,而GP1的总体效果最好,尤其是在肝脏脂质过氧化的几项指标中效果接近于空白组（P>0.05）,优于药物组和BF组。由此,所筛选获得的S. thermophilus GP1、E. faecium ST1、L.rhamnosus绿杆、Bifidobacterium lactis BF为具有酒精性肝损伤保护作用的优良乳酸菌。