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阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease, AD),又名老年痴呆症,是一种在中老年人群中常见的中枢神经系统退行性疾病,并且是导致老年人痴呆的主要原因。AD以进行性的记忆与认知障碍、人格改变为主要特征,具体症状表现为早期的短期记忆缺失、学习能力下降；中后期的智能障碍,包括视空间感知障碍、语言障碍、执行功能障碍及性格异常等,直到严重者丧失自理能力,最终死亡,在发达国家已成为继心脑血管疾病和肿瘤之后危及人类生命的第四大疾病。AD患者的大脑内会出现一系列的病理变化,主要表现为老年斑(senile plaque, SP)沉积,神经元纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT),大脑皮层萎缩、脑室增大,伴随前脑基底、海马和大脑皮层神经元的大量丢失,同时在中枢及外周的炎症反应也是AD重要的临床表现之一。嗅觉是哺乳动物最重要的感觉之一,主要包括嗅觉灵敏度、嗅觉探测和嗅觉识别三个方面,同时嗅觉记忆也能体现嗅觉功能的好坏。临床研究表明,嗅觉的减退甚至缺失会伴随着年龄的增大越来越严重,而且在AD患者早期就能检测出嗅觉功能的失常。通过对AD动物模型的研究,进一步证实了嗅觉损伤出现在AD导致的其他认知损伤之前,能够作为诊断AD的一项早期标准。早老素(Presenilin)是Y分泌酶的主要催化成分,是一种跨膜的天冬氨酸蛋白酶,有Presenilin-1(PS1)和Presenilin-2(PS2)两种类型,PS基因的突变是引起家族性AD(Familial Alzheimer’s disease, FAD)的主要原因之一。利用前脑特异性敲除PS1基因的小鼠与全身性敲除PS2基因的小鼠杂交的方法,可以培育出PS1/PS2双基因敲除小鼠(Presenilin-1/2double knockout mice, DKO小鼠)。DKO小鼠能够表现出AD的主要病征,包括前脑特异性萎缩、神经元大量凋亡、海马突触可塑性下降、tau蛋白磷酸化和随龄性的认知功能障碍等。因此,DKO小鼠是研究AD病理过程以及发病机制的理想动物模型。1Presenilin-1/2双基因敲除对小鼠嗅觉功能的影响为了研究Presenilin-1/2双基因敲除对小鼠嗅觉功能的影响,本实验利用埋藏食物实验、嗅觉躲避实验和嗅觉记忆实验三种行为学方法,分别对2月龄和6月龄不同性别的DKO鼠和CON鼠进行嗅觉功能的检测。在埋藏食物实验中,DKO2月龄和6月龄小鼠的嗅觉探测能力都出现明显障碍,且DKO6月龄小鼠的嗅觉探测能力减弱更加严重。在嗅觉躲避实验中,DKO2月龄小鼠的嗅觉识别能力与CON组相比没有差异,而DKO6月龄小鼠则表现出嗅觉识别能力的明显缺陷,同时DKO6月龄小鼠的嗅觉识别能力减弱也比CON6月龄小鼠更加严重。在嗅觉记忆实验中,DKO6月龄雄鼠的嗅觉记忆能力有明显缺陷。实验结果表明,Presenilin-1/2双基因敲除不仅能够引起小鼠嗅觉功能的缺陷,同时还能加速小鼠随龄性的嗅觉减弱的进程。2神经干细胞的体外培养和神经元新生的在体检测本实验利用含有EGF和bFGF生长因子的选择性培养基,对3月龄C57BL/6小鼠SVZ区提取的成体神经干细胞(adult neural stem cells,aNSCs)进行原代培养,结果显示,SVZ区提取的神经干细胞在体外培养一星期以后,能长成直径50umm以上的神经球(neurosphere),经吹打后进行传代培养,一星期后能再次长到直径50umm左右。另外,通过对3月龄C57BL/6小鼠腹腔注射BrdU标记物,能够观察SVZ区的神经元新生情况,结果中呈BrdU阳性的细胞为正在增殖的细胞,可认定为神经干细胞或者神经祖细胞。