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灭螺植物资源的开发与利用,是当前灭螺研究的热点。为了评价百部的灭螺前景,为开发新的灭螺药物和为生态工程灭螺提供新的物种资源和理论支持,本文进行了中药百部灭螺效果的研究,并提取分离出百部总碱,然后从生物化学和微观结构的角度探究了百部总碱的灭螺机理。
⑴用不同浓度的百部原粉水浸液浸泡钉螺,结果显示中药百部对钉螺有一定的杀灭效果,其72、96和120 h的LC90分别为554.23、342.99和278.08mg/L。经800mg/L百部水浸液处理处理120 h,鲤鱼死亡率为0。
⑵应用系统分离法从1000g中药百部中提取分离得到4g百部总碱。浸杀试验结果显示不同浓度的百部总碱药液对钉螺均有一定的杀灭作用。其48 h、72 h和96 h的LC50分别为39.99、20.32和10.00mg/L。上爬试验显示低浓度(5、10、20 mg/L)的药液会明显刺激钉螺上爬,而高浓度(40、80、160 mg/L)的药液又能抑制钉螺上爬。160 mg/L的药液能完全抑制钉螺上爬。
⑶用浸杀72 h的LC50浓度百部总碱药液浸泡钉螺,分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和蒽酮比色法观测在浸泡过程中钉螺肝脏酯酶同工酶活性及软体组织糖原含量的变化情况。同时设一无氯水浸泡组作为对照。结果显示,在百部总碱浸泡的96 h内,钉螺酯酶酶活先升高,后降低,最后几乎完全丧失;体内糖原含量则随浸泡时间的延长而逐步降低,浸泡96 h后较之对照组含量下降72.00%。
⑷扫描电镜观察百部总碱对钉螺头足部的影响。结果显示,钉螺触角趋于平坦,头部和足部肿胀,局部破损。足部表面绒毛脱落,出现许多孔洞,受浸蚀程度严重。损伤程度随时间延长而加深。
⑸透射电镜观察百部总碱对钉螺肝细胞的影响。结果显示,钉螺在LC50的百部总碱中浸泡24 h后,其肝脏细胞病变迹象明显,线粒体大量聚集,粗面内质网散乱分布,部分线粒体表现嵴模糊病损,细胞游离端微绒毛断裂、脱落;浸泡72 h后,钉螺肝细胞细胞破碎,细胞核核膜也开始破裂,胞浆水肿,细胞器结构无法辨认,并由于自溶作用出现空泡,细胞坏死。
本实验结果表明,百部是一种较有研究价值的新型植物灭螺资源,百部总碱是百部的杀螺有效成分,它可通过以下途径抑制钉螺生存:(1)直接对钉螺软体造成损伤,影响其活动;(2)影响钉螺体内的特定解毒酶系统;(3)影响钉螺体内能量代谢;(4)破坏钉螺的肝细胞结构,引起肝功能下降。