人参皂苷Rb1是人参二醇系皂苷，主要分布于五加科植物人参、三七、西洋参等植物中，是一种极具药用价值的化学物质[1-3]。研究表明Rb1具有抗缺血再灌注损伤、抗衰老、抗肿瘤等方面[4-9]的作用。其中Rb1对脑缺血损伤的保护作用是目前国内外学者研究的热点。　　Rb1可以明显缩小缺血再灌注损伤后脑梗死的体积，通过上调神经元凋亡抑制蛋白、半影区葡萄糖转运体1和葡萄糖转运体3的表达等来发挥脑保护的作用，表明Rb1具有较好的临床应用前景。已有复方制剂中Rb1的药动学的研究，但是由于复方制剂组分复杂，不同组分之间药动学有可能会相互影响，因此我们考察了口服与静脉注射Rb1单体在正常大鼠体内的药动学特征。另外由于脑缺血可能会对生物体的代谢过程产生影响，因此我们建立了脑缺血再灌注的大鼠模型，考察了Rb1单体应用于脑缺血模型大鼠体内后血浆与脑组织中的药动学，并与正常大鼠体内的药动学进行比较，以便更好地认识Rb1的脑保护作用，从而为Rb1资源的进一步药用价值的开发和临床应用提供依据。同时我们还观察了脑缺血再灌注不同时间内大鼠血清中一氧化氮、超氧化物歧化酶含量变化，并将其与药动学结果结合研究，探讨浓度-时间-效应的三维关系，以期望能够更加真实客观的反映Rb1在体内的药动学与药效学的联系，为临床应用提供一定的参考依据。　　第一章人参皂苷Rb1在大鼠血浆中药物浓度检测方法的建立及其体内药动学研究　　目的：建立大鼠血浆中人参皂苷Rb1的LC-MS/MS分析方法，分别考察单次静脉注射和口服给药不同时间点，人参皂苷Rb1在正常大鼠体内的药动学特征。　　方法：正常大鼠灌胃和静脉注射后，不同时间点眼底静脉丛取血。以地高辛为内标，血浆样品经固相萃取柱预处理。色谱柱：Shim-pack XD-ODS（2.0×30 mm，2.2μm）；预柱：Shim-pack GVD-ODS（2.0×5mm，4.6μm），柱温：40℃；流动相：10mMo l乙酸水溶液，甲醇，梯度洗脱，流速0.28 mL·m in-1；电喷雾离子源，四级杆质谱检测器，采用三重四极杆质谱仪进行多重反应离子监测模式（MRM），检测离子的质核比分别是345.2（地高辛）和179.0（人参皂苷Rb1）。建立 LC-MS/MS分析方法测定大鼠体内Rb1含量，运用PKSolver V2.0软件计算药动学参数。　　结果：人参皂苷R b1的线性范围为1～500ng/mL，相关系数为0.9992，定量下限为1ng/mL；日内、日间相对标准差均小于7％；提取回收率为90.1%～113.6%，基质效应为84.3%～91.6%。Rb1在口服灌胃组大鼠体内的主要药动学参数Cmax、tmax、T1/2、AUC0~96 h分别为（2.01±0.93）μg·L-1，（7.20±5.49）h，（25.91±15.84）h，（88.47±58.99）μg·h·mL-1。Rb1在静脉注射组大鼠体内的主要药动学参数 Cmax、t1/2α、t1/2β、AUC0-96 h分别为（194.81±28.84）μg·mL-1，（0.18±0.05）h、（14.66±4.19）h、（1671.16±388.91）μg·h·mL-1；Rb1的绝对生物利用度为0.62%。　　结论：试验建立的LC-MS/MS分析方法，高效快速，能够应用于Rb1的生物体内药动学研究；Rb1绝对生物利用度为0.62%，说明Rb1口服给药吸收比较差，静脉注射直接进入血管，生物利用度高，推荐临床给药优先选择。　　第二章线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型　　目的：对传统的线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型的方法进行改进，建立适用，成功率高的制作大鼠脑缺血再灌注模型的方法。　　方法：本研究在试验中采用的方法是，分离颈总动脉（common carotid artery，CCA）、颈内动脉（internal carotid artery，ICA）、颈外动脉（external carotid artery，ECA），在CCA上剪口，在CCA远心端与ICA处分别备线，将线栓由 CCA末端附近插入，再由 ICA进入，感觉有阻碍时停止，即到达了大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）的起始处。通过行为学评分判定模型成功与否，然后通过大鼠脑组织TT C染色结果，以及HE染色结果进一步验证模型是否成功。　　结果：本试验所选择的方法模型成功率为54%。筛选行为学评分为1-3分作为成功的模型。TTC染色发现成功模型大鼠大脑缺血区呈白色，HE染色时可见缺血中心区细胞固缩浓染，部分神经细胞脱失。　　结论：本方法制作的动物模型方法简单，节约时间，手术约15-20分钟即可完成一只大鼠模型的制作，而且手术过程中手术操作得当一般不会有出血现象发生，为后续的脑缺血模型药动学研究奠定良好的基础。　　第三章人参皂苷Rb1在MCAO/R大鼠血浆及脑内的药动学研究　　目的：考察单次静脉注射给药后，人参皂苷Rb1在脑缺血再灌注模型大鼠血浆与脑组织中的药动学特征。　　方法：制作的大鼠模型在缺血2h后，将动脉内的尼龙线拔出，实行再灌注，同时静脉注射 Rb1，不同时间点大鼠腹主静脉取血，取血后立刻断头取脑。测定大鼠血浆中药物的浓度，比较模型大鼠与正常大鼠药动学参数的差异；建立LC-MS/MS方法测定大鼠缺血侧和非缺血侧脑组织内Rb1的含量，考察其浓度及K值（brain/plasma concentration ratios）的差异。　　结果：在MCAO/R大鼠血浆中的药动学参数Cmax、t1/2α、t1/2β、AUC0~96 h分别为（0.17±0.05）μg·mL-1，（0.30±0.21）h，（17.85±3.07）h，（1.75±0.46）mg·h·mL-1，与正常大鼠血浆中的药动学参数比较，发现两者K10有显著性差异（P<0.05）。大鼠静脉注射Rb1后，在48 h和96 h时，脑缺血侧与非缺血侧Rb1的药物浓度和K值有显著性差异（P<0.05）。　　结论：模型大鼠用药后K10值下降，表明大鼠脑缺血再灌注后体内的Rb1从中央室向外消除减慢，说明在病理状态下，大鼠体内药物消除速率降低。脑缺血侧与非缺血侧Rb1的药物浓度和K值的显著性差异说明Rb1在脑缺血侧跨血脑屏障渗透性增加，可能与脑部转运体有关。　　第四章人参皂苷Rb1对MCAO/R大鼠血清中SOD和NO的影响　　目的：测定人参皂苷Rb1在大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间对血清中一氧化氮（nitric oxide，NO）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的含量变化的影响，探讨在Rb1作用下两者随损伤时间的变化规律。　　方法：考察脑组织缺血再灌注1h、2h、4h、8h、24h、48h后，给药组、模型组、假手术组大鼠血清中一氧化氮（NO）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。　　结果：检测结果表明，在1 h，4 h，48 h时，给药组的大鼠血清SOD浓度与模型组大鼠SOD含量有显著性差异（P<0.05）。给药组与模型组大鼠血清中NO的含量在1 h，24 h，48 h均有显著性差异。　　结论：根据试验结果推测，Rb1对大鼠血脑屏障的保护作用一方面可能是通过Rb1进入脑内发挥脑保护作用，从而降低大鼠血清中NO的含量，另一方面由于 Rb1具有清除自由基的作用，因此能够降低48 h时MC AO/R大鼠血清中SO D的含量。