目的:分离培养原代RPE细胞,构建H2O2诱导视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞的衰老模型,研究白藜芦醇在RPE细胞衰老中的作用,探讨特异性蛋白1（specificity protein 1,SP1）、巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）蛋白和RPE纤毛蛋白与RPE衰老的关系。方法:1.胰蛋白酶消化法分离培养原代人RPE细胞,免疫荧光法检测原代人RPE细胞中特异性蛋白RPE65的表达。2.用不同浓度的H2O2诱导RPE细胞6、12、24h,构建衰老模型,CCK8法检测细胞活力。3.SA-β-gal染色法检测RPE细胞衰老情况,观察细胞形态。4.用不同浓度的白藜芦醇（resveratrol,RES）诱导RPE细胞6h,CCK8法检测细胞活力。5.蛋白质印迹法检测H2O2处理的RPE细胞中SP1蛋白、MIF蛋白和IFT88蛋白的变化,以及RES对上述变化的作用。结果:1.免疫荧光法检测出原代RPE细胞中均有特异性蛋白RPE65的表达,细胞纯度良好。2.CCK8法和SA-β-gal染色法筛选出构建RPE细胞衰老模型的最佳条件为:200μmol/L H2O2诱导RPE细胞6h。此时,H2O2抑制RPE细胞活力且呈浓度依赖性。3.在0-80μmol/L的浓度范围内,RES增强RPE细胞活力,在20μmol/L时达到最大。4.RES作用于H2O2处理的RPE细胞中,降低了细胞衰老率。5.H2O2诱导RPE细胞后,与对照组相比,SP1蛋白、MIF蛋白和IFT88蛋白表达均增加。RES作用于衰老RPE细胞后,与衰老RPE模型组相比,SP1蛋白和IFT88蛋白均有所降低,但仍高于衰老RPE模型组。结论:1.胰蛋白酶消化法能分离得到纯度良好的原代人RPE细胞。2.用200μmol/L H2O2诱导RPE细胞6h可导致细胞衰老,用于构建RPE衰老细胞模型。3.RES可以抑制H2O2诱导的RPE细胞衰老。4.H2O2诱导后,RPE细胞中SP1蛋白、MIF蛋白和IFT88蛋白均增加。同时加入RES和H2O2,SP1蛋白和IFT88蛋白又有所降低,说明RES抗衰老的机制可能下调细胞内某些蛋白的表达来抵御外来的ROS。同时也说明SP1蛋白和IFT88蛋白在RPE细胞衰老中发挥了重要作用。MIF蛋白和IFT88蛋白作为下游蛋白,可能受到SP1的调控。