牛膝多糖免疫调节作用及其机制的研究

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目的:  牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)是从中药牛膝中提取的一种水溶性小分子多糖化合物,具有提高机体免疫功能,抑制肿瘤生长,保肝,升高白细胞及缓解炎症等多种生理活性。近年来,牛膝多糖在药理研究和临床应用上备受关注。但有关牛膝多糖免疫活性的研究报道大多仅局限于其对免疫细胞的活化或增值作用,并没有深入研究其作用机制。本文主要从细胞水平研究牛膝多糖对腹腔巨噬细胞(J774A)的免疫调节作用并探讨其作用机制及信号转导途径,为牛膝多糖的进一步药物研发提供理论基础和实验依据。  方法:  (1)采用光学显微镜观察牛膝多糖对J774A细胞形态的影响。  (2)采用激光共聚焦显微镜观察ABPS对NF-κB核转位的影响。  (3)采用ELISA法检测ABPS对J774A细胞分泌炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β)的影响,及抗TLR4/TLR2/CD14抗体和NF-κB抑制剂对ABPS诱导J774A细胞释放TNF-α、IL-1β作用的影响。  (4)采用RT-PCR检测ABPS对J774A细胞TNF-α、IL-1β、TLR4、TLR2、MyD88、TRAM、p-p38、p38 MAPK等mRNA表达的影响。  (5)采用Western Blot检测ABPS对J774A细胞核内NF-κB变化,及对细胞TLR4、TLR2、MyD88、TRAM、p-p38、p38 MAPK表达的影响。  结果:  (1) ABPS能够使J774A细胞表面突触明显地增加且具有浓度依赖性。  (2) ABPS能够促进NF-κB核转位。  (3) ABPS能显著促进J774A细胞分泌炎性细胞因子TNF-伐及IL-1β,且具有浓度依赖性;NF-κB抑制剂(PDTC)能够显著的抑制牛膝多糖刺激J774A细胞分泌细胞因子;抗TLR2抗体对牛膝多糖刺激J774A细胞分泌细胞因子没有明显的抑制作用;抗TLR4抗体能够较显著地抑制牛膝多糖刺激J774A细胞分泌细胞因子。  (4) ABPS能促进TNF-α、IL-1β mRNA的表达,且具有浓度依赖性;能促进TLR4 mRNA的表达,而对TLR2 mRNA的表达没有明显差异;能显著的提高MyD88基因的表达,但TRAM mRNA的表达没有显著变化。  (5)细胞核内蛋白NF-κB随ABPS给药组浓度的增高而增高;ABPS给药组与对照组比较TLR4的表达显著增高,而TLR2的表达没有明显差异,MyD88表达明显升高,而TRAM的表达没有明显差异。  结论:  ABPS能促进J774A细胞分泌炎性细胞因子TNF-α及IL-1β且具有浓度依赖性,同时NF-κB抑制剂PDTC及抗TLR4抗体能显著抑制ABPS刺激TNF-α及IL-1β的分泌;ABPS能促进NF-κB核转位;ABPS能够促进MyD88的表达,而TRAM的表达没有明显差异。综上所述,ABPS可能通过TLRs(TLR4)信号通路的MyD88依赖性途径介导其免疫调节作用。
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