基于红细胞的纳米递药系统构建及评价

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红细胞是人体血液中的重要组成部分,在人体中很多生命活动所必需的物质都需要红细胞进行转运。而随着时代的发展,细胞制剂已渐渐成为研究的热点。因此,以红细胞为载体包载药物成为细胞制剂研究的良好选择。本论文构建基于红细胞的纳米递药系统。以红细胞为药物载体,包载抗癌药物盐酸阿霉素(DOX),并利用生物素-亲和素系统结合原理,将生物素化的环肽RGD(c RGD)与吲哚菁绿(ICG)修饰到红细胞表面。以期实现精准靶向、血液长循环、药物定点释放、以及光疗化疗联合治疗的功能。红细胞递药系统制备工艺优化与表征。通过正交试验,考察低渗透析高渗封装过程中时间与温度对红细胞的影响,确定最佳载药条件。在最佳载药条件下验证不同加药量对红细胞的影响,确定最佳加药量。而后对红细胞递药系统进行表征。结果显示,红细胞递药系统最佳制备工艺为4℃低渗透析30 min,37℃高渗封装30 min,加药量为1mg/m L。荧光分光光度计485 nm与808 nm激发下,表现出DOX与ICG荧光特性。紫外可见分光光度计中,785 nm处出现与ICG相同最大吸收峰。能谱中表面S元素浓度含量为6.067%。共聚焦显微镜显示,盐酸阿霉素被包载入红细胞内部。在理化性质研究中通过方法学考察,确定可行的UPLC测定DOX的方法。马尔文激光粒度分析仪,SEM,TEM等进行形态、粒径、电位分析。膜联蛋白法分析红细胞表面磷脂酰丝氨酸的暴露情况,并对红细胞递药系统稳定性与释放度进行研究。结果显示:红细胞递药系统平均药物含量为0.9555 mg/m L,平均粒径为3332 nm,分散指数为0.102,电位值为-13.3 m V。膜联蛋白法分析磷脂酰丝氨酸的暴露率为3.11%。七天内红细胞外观形态无明显变化,5天内释放度为76.13%,给予激光照射,6 min内释放度达到87%,150 s温度可达到47.97℃。在细胞实验中,对MCF-7、U87、U251、SK-MEL-5以及H460五种细胞给药,验证红细胞递药系统靶向性与细胞毒性。结果显示:红细胞大量覆盖在U87、U251、SK-MEL-5以及H460细胞表面,且荧光强度高于MCF-7细胞。CCK-8细胞毒性实验中五种细胞IC50值分别为MCF细胞81.64±0.78μg/m L、U87细胞51.31±0.72μg/m L、U251细胞49.10±0.43μg/m L、SK-MEL-5细胞52.94±0.98μg/m L、H460细胞52.58±0.30μg/m L说明在靶向作用下,光疗与化疗联合治疗效果良好。在体内靶向实验中,给小鼠注射未修饰的载药红细胞和修饰后的载药红细胞结果显示:注射给药后给予激光照射,修饰后的载药红细胞组小鼠肿瘤部位温度50 s内可达到48.2℃,并且荧光强度较非修饰组高。综上所述,本课题成功制备出表面修饰c RGD与ICG的载盐酸阿霉素红细胞递药系统。制备工艺简单稳定,未对红细胞造成损害,药物的快速释放证明具有良好的定点释放功效。通过体内外一系列相关实验,考察了该红细胞给药系统近红外光热特性、稳定特性等;与单途径癌症治疗途径相比较,证实该红细胞给药系统能有效、多重、主动靶向地富集于病变部位,通过激光照射,光疗与化疗表现出良好协同抑制肿瘤细胞生长效果,具有癌症治疗的价值。该研究为主动靶向、热疗和化疗协同治疗癌症奠定基础,并为癌症多途径协同治疗提供新思路。
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