本文从以下几个方面进行论述：　　第一部分 Sanger测序对诊断SMN1基因复合杂合突变型脊髓性肌萎缩症的诊断价值　　研究目的：　　建立并评价Sanger测序技术在诊断SMN1基因复合杂合突变型SMA病例中的意义。　　研究方法：　　选取首都儿科研究所2014年1月～2016年6月就诊的52例符合国际诊断标准的SMA患儿，应用PCR扩增52例患儿的SMN1和SMN2基因第7外显子，Sanger测序通过识别扩增片段中SMN1和SMN2基因固有差异碱基的峰高，判断SMN1基因纯合或杂合缺失。当SMN1基因杂合缺失时，经Sanger测序筛查SMN基因所有外显子、外显子与内含子交界区域的变异位点。最后通过MLPA方法验证SMN1基因杂合缺失，并利用克隆测序确定突变点来自SMN1基因，完成SMN1基因复合杂合突变的确诊。　　研究结果：　　经Sanger测序检测的52例SMA患儿中47例为SMN1基因纯合缺失，5例为SMN1基因杂合缺失。MLPA方法验证了后5例患儿SMN1基因拷贝数均为1，Sanger测序检测出5例患儿均存在SMN基因点突变，并通过克隆Sanger测序验证了该5例患儿突变均位于SMN1基因。　　研究结论：　　Sanger测序技术适用于SMN1基因复合杂合突变病例的诊断，对提高SMA基因诊断率具有临床意义。　　第二部分 姜黄素对脊髓性肌萎缩症的治疗研究初探　　研究目的：　　探讨姜黄素对SMA患儿淋巴细胞SMN2基因表达水平的影响，以评估姜黄素是否可以提高患儿全长SMN2基因转录水平，为今后SMA临床药物试验和个体化治疗提供有力的实验数据参考。　　研究方法：　　抽取1例SMA3型患儿（SMN1∶SMN2基因拷贝数为0∶3）的外周静脉血，建立淋巴细胞系。采用细胞毒性检测实验测定姜黄素对淋巴细胞的药物毒性作用，选取三个适宜的药物浓度。将淋巴细胞培养至对数生长期后接种到6孔板，三种浓度的姜黄素分别加至6孔板内的淋巴细胞，以仅加溶剂DMSO组作为阴性对照组，分别作用12h、24 h、48 h后，收集细胞。提取细胞总RNA，经逆转录后行Real-time PCR，采用绝对定量方法计算各浓度组及阴性对照组FL-SMN2转录本表达量。经SPSS软件分析、比较经姜黄素作用后，不同浓度组细胞的FL-SMN2转录本表达量与阴性对照组的差异以及各浓度组间差异是否有统计学意义。　　研究结果：　　1.细胞毒性检测实验(CCK-8)　　随着姜黄素作用浓度增加，淋巴细胞的存活率逐渐下降，浓度在25μM左右时，淋巴细胞存活率为50.4％，姜黄素浓度为50μM时，淋巴细胞存活率下降至20.4％。故选取10μM、15μM、20μM的姜黄素作用于淋巴细胞，提取细胞RNA用于分析比较。　　2.姜黄素可以提升FL-SMN2转录本水平　　药物处理12h后，三个浓度组FL-SMN2转录本较阴性对照组均未见明显提升(P＞0.05);药物处理24 h后，三个浓度组FL-SMN2转录本均有提升，分别为阴性对照组的1.35、1.45、1.28倍，差异均有统计学意义(p＜0.05);药物处理48 h后，三个浓度组FL-SMN2转录本亦均有提升，分别为阴性对照组的1.49、1.57、1.48倍，且差异均有统计学意义(p＜0.05)。　　3.姜黄素对SMN2基因转录影响的时间依赖性分析　　在同一药物浓度作用条件下，比较三个时间段FL-SMN2转录本量的差异。三组药物作用浓度下，随着药物作用时间延长，FL-SMN2转录本均逐渐提升，以药物作用48h后，FL-SMN2转录本的提升量最大，较12h组差异有统计学意义(P＜0.05)，但较24h组差异无统计学差异(P＞0.05)。　　4.姜黄素对SMN2基因转录影响的剂量依赖性分析　　在同一作用时间下，比较三个浓度组间FL-SMN2转录本量的差异。药物处理24 h，15μM浓度组FL-SMN2转录本提升量较10μM组提升倍数大，但差异无统计学意义(P＞0.05)，而20μM组提升幅度较15μM组有所下降，差异有统计学意义(P＜0.05);药物处理48 h，仍以15μM组FL-SMN2转录本提升倍数最大，但与另外两浓度组间提升量差异无统计学意义(P＞0.05)。　　研究结论：　　姜黄素可以促进SMA修饰基因SMN2全长转录本的表达;一定作用范围内，随着姜黄素浓度升高及作用时间延长，其对SMN2转录水平影响越大。