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杜氏盐藻(Dunaliella salina)是研究植物耐盐机制的重要模式生物,也是寻找植物耐盐基因的理想生物。磷脂酶C(phospholipase C,PLC)是肌醇磷脂信号途径中的关键酶,能水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate,PIP2)产生肌醇-1,4,5-三磷酸(inositol-1,4,5-triphosphate,IP3)和二酰甘油(diacylglycerol,DAG),其中IP3可导致细胞内Ca2+的释放,可见PLC处于Ca2+和DAG这两个重要第二信使的上游。因此,深入探讨PLC的生物学特征及功能具有重要的科学意义。本文克隆了盐藻PLC基因,命名为DsPLC,并利用实时荧光定量PCR的方法检测了该基因在盐胁迫下表达量的变化情况。这些研究结果为进一步阐明DsPLC的功能及其作用机制奠定了分子基础。主要的实验方法和结论如下:1.通过RT-PCR和RACE技术成功地克隆了盐藻的磷脂酶C基因(GenBank AccessionNo.KF573428),命名为DsPLC。DsPLC基因的cDNA全长为2628bp,其中5′UTR为48bp,3′UTR为798bp,开放阅读框为1782bp,编码593个氨基酸。2.生物信息学分析表明:该蛋白为不具跨膜结构和信号肽的亲水性稳定蛋白,定位于细胞质基质;DsPLC存在两个保守区域:31-175位的氨基酸构成的X结构域和337-427位的氨基酸构成的Y结构域,其中X区46位和93位的His是其活性位点;并且存在多个潜在的磷酸化位点;二级结构的主要元件为无规卷曲和α-螺旋,催化区在三维结构上形成一个活性空腔;氨基酸序列同衣藻磷脂酶C(XP001696502.1)具有很高的相似性(74%),进一步的进化分析结果表明,DsPLC与衣藻和团藻的磷脂酶C的亲缘关系最近。3.利用实时荧光定量PCR的方法检测了DsPLC在高盐(3mol/L NaCl)胁迫下表达量的变化情况。结果表明,在高盐(3mol/L NaCl)胁迫下,盐藻DsPLC的表达量明显升高,且胁迫4h时表达量达到最高,为在正常生长状况下(1.5mol/L NaCl)表达量的10倍左右,差异达到极显著水平(P<0.01)。随着胁迫时间的延长DsPLC的表达量有所下降,但仍高于正常水平。这些研究结果,为深入研究盐藻的耐盐机制提供了新的资料,并且为进一步在蛋白质水平上研究DsPLC在盐藻耐盐机制中的作用奠定了基础。