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人类的T淋巴细胞主要分为两类，一类是αβ T细胞，占据外周血中T细胞数目的约95％;另外一类是γδT细胞，占据外周血中T细胞的5％。αβT细胞是细胞免疫的主要参与者，免疫系统依赖于细胞表面的αβ T细胞受体(TCR)识别主要组织相容性复合物(MHC)提呈的抗原多肽(peptide)。由于抗原的多态性非常高，这就要求机体必须进化出相应的机制来生产足够多样的抗原受体来识别抗原。TCR作为一类重要的免疫细胞受体，它的多样性也是非常庞大的，所以机体内所有的TCR在一起就构成了个体的TCR库(TCR repertoire)。 αβ TCR是由α链和β链构成的异源二聚体分子，其中染色体上编码α链的有两种基因片段，它们散在分布于人类14号染色体上，分别是Variable(V)和Joining(J)两种基因片段:而β链则由位于人类7号染色体上散在分布的V、Diversity(D)和J三种基因片段构成。每一种基因包含有数个基因片段，而不同的基因的基因片段通过体细胞重组形成多种多样的TCR。TCR的多样性包含两个方面:一是不同的V、D和J基因片段之间的组合产生了组合多样性;二是体细胞重组过程中，相互连接的两个基因片段之间有随机核苷酸的插入和删除造成的结合区的多样性。两种多样性结合在一起共同产生了理论上数目极为庞大的TCR库，据计算αβTCR的多样性可达到1018。 TCRδ也是由基因片段通过体细胞重组的机制产生。构成TCRδ的基因座位位于TCRα的座位里。TCRδ的V基因片段共有8个，已知其中的5个也可以被TCRα共用，而TRDV1、TRDV2和TRDV3被认为不能被共用。TRDV1被报道可以与几个TRAJ发生重组形成TCRα链。那么TRDV1是否也是一个可以被TCRα和TCRδ共用的基因片段呢？TCRβ链的基因座位含有两个D基因片段，教科书上认为T细胞在发育过程中只选择其中的一个D基因片段参与重组形成TCRβ。然而，体细胞重组机制需要满足12/23法则，而D基因片段两端的信号识别序列分别包含12和23bp间隔序列，所以理论上D-D融合是可以存在的。 本研究选择了三个健康个体，他们具有不同的种族，不同的HLA型别。我的研究从每个个体的50ml外周血分离到的PBMC抽提到mRNA作为模版，利用5RACE技术首先扩增了TCR的V区序列。高通量测序测定了三个个体的TCRα和TCRβ的序列，每个个体的每条链都获得了6Gb的序列数据。 对于TCRβ库，我们的数据显示V/J基因的使用和V-J配对对于任意个体都是有偏好性的，同时在个体之间又呈现出显著的线性相关。这些结果与已发表的研究结果是一致的，这表明我们的研究方法是可信的。同时，TCRα库在V/J基因的使用和V-J配对上与TCRβ库类似的规律，即V/J使用都有偏好性，在个体之间显著线性相关;V-J配对同样具有偏好性，在个体之间也是显著线性相关。此外，在三个个体中TRDV可以与共计50个功能性TRAJ基因片段中的49个发生重组，且TRDV1的使用频率与普通的TRAV及TCRα和TCRδ共用的V基因片段在同一水平。这些结果表明TRDV1也是一个TCRα和TCRδ共用的V基因片段，因此被命名为TRAV42/TRDV1。无论是α还是β链，都有约2-5％的CDR3是被三个个体共享的，而且这些CDR3序列对于任何个体都是优势CDR3。本研究还首次报道了在TCRβ里存在着D-D重组，他们是构成长链CDR3序列的一个重要因素。 T细胞的活化除了需要TCR识别peptide-MHC复合物提供第一信号外，还需要位于T细胞表面的共刺激分子与抗原提呈细胞(APC)表面的配体结合提供第二信号。PD-L1就是位于抗原提呈细胞表面的一种共刺激分子配体，他的受体是位于T细胞表面的PD-1分子。PD-1/PD-L1通路向下游传递抑制性的信号用以调节T细胞的功能。本文对人PD-L1的三维结果进行了解析，详细分析了PD-L1单体分子之间的相互作用。在PD-L1的一个非对称单元里有两个PD-L1单体分子。进一步分析单体分子的结合面积和作用方式，发现非对称单元里两个单体分子之间有形成二聚体的潜在趋势。而EGS交联试验也证实本观点。结合同一家族其它蛋白形成二聚体的态势，本研究认为PD-L1的这种二聚体可能是一种进化上的遗留产物或是具有某种功能的单位。 鸭产蛋量下降综合症病毒(DEDSV)是一种新发黄病毒，导致感染的鸭产蛋量急剧下降，死亡率约为5-15％。该病毒与东南亚地区从蚊子分离到的Tembusu病毒(TMUV)亲缘关系最近。本研究利用与扩增TCR的V区序列同样的方法即利用5RACE技术结合传统的PCR法，克隆扩增并测定了7株DEDSV的全基因组序列。同时首次报道了TMUV和其亚型Sitiawan病毒(STWV)的ORF序列。基于全基因组序列和ORF序列构建的进化树确认了DEDSV和TMUV/STWV的近亲关系。本研究还表征了上述病毒的蛋白剪切位点、潜在的糖基化位点以及保守的蛋白基序，并鉴定了病毒的5和3-NCR里的保守序列，预测并分析了病毒末端序列的二级结构。DEDSV与相关病原性黄病毒的交叉反应性表明DEDSV与DENV有明显的近亲关系，这提示我们DEDSV对于人类有潜在的威胁。而且DEDSV能被DENV2广谱抗黄病毒的单抗2A10G6所识别。